【產(chǎn)品名稱】

通用名：雞傳染性法氏囊抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Diagnostic Kit For Antibodies To Infectious Bursal Disease Virus  (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒

【預(yù)期用途】 雞傳染性法氏囊是由傳染性法氏囊病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）引起的以破壞雞的中樞免疫器官——法氏囊為主要發(fā)病機(jī)理的病毒性傳染病，該病病毒損傷法氏囊而導(dǎo)致免疫抑制，使病雞對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、雞球蟲(chóng)等病原更易感。

    本試劑盒適用于：測(cè)定雞血清中雞傳染性法氏囊病病毒抗體的相對(duì)水平?？捎糜谠u(píng)估雞群雞傳染性法氏囊病病毒疫苗免疫狀況分析。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被雞傳染性法氏囊VP2抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)雞血清或血漿中雞傳染性法氏囊病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞傳染性法氏囊病毒的抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加底物液，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性法氏囊病毒抗體。

【試劑盒組成】

序號(hào)	名稱	規(guī)格/96T×1
1	酶標(biāo)記物	22ml×1(黃蓋)
2	樣品稀釋液	50ml×1(透明蓋)
3	10X濃縮洗滌液	50ml×1(白蓋)
4	底物液	12ml×1(橙蓋)
5	終止液	12ml×1(藍(lán)蓋)
6	陽(yáng)性對(duì)照血清	1.0 ml×1(紅蓋)
7	陰性對(duì)照血清	1.0 ml×1(綠蓋)
8	酶標(biāo)板	96T×1
9	蓋板膜	1
10	自封袋	1
11	說(shuō)明書(shū)	1

 

【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。

包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存。

2. 用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（如5ul血清加入195ul樣本稀釋液）稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋成工作洗滌液(如10ml濃縮洗滌液加入90ml的去離子水中)。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3. 陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰性對(duì)照血清、陽(yáng)性對(duì)照血清（不用稀釋）100μl；樣品孔每孔加入稀釋好的待測(cè)樣本100μL。

4.加樣后，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，后一次拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl。蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液100μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，充分混勻，終止后讀數(shù)。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，當(dāng)樣本的S/P≥0.2時(shí)判為陽(yáng)性；樣品S/P值＜0.2時(shí)判為陰性

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD值。檢測(cè)結(jié)果有效的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔的平均OD值≥0.6，陰性對(duì)照孔的平均OD值必須＜0.15；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對(duì)水平的高低由S/P值決定，S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:

  S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對(duì)照孔平均OD450/630值，PCx(—)表示陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD450/630值。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    1．嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球樣本可能導(dǎo)致假陽(yáng)性；長(zhǎng)菌的樣本可能導(dǎo)致假陰性。

2．因個(gè)體差異或免疫時(shí)間長(zhǎng)短等因素可能會(huì)出現(xiàn)個(gè)別雞只免疫疫苗后檢測(cè)結(jié)果為陰性。

3．陽(yáng)性結(jié)果用于感染雞的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他診斷方法和臨床資料進(jìn)行分析。。

【注意事項(xiàng)】

1．使用試劑盒之前，一定要仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

2.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

3.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。

4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開(kāi)袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。

6.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

7.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

9.不同批號(hào)試劑組分不得混用。