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技術(shù)文章

雞傳染性法氏囊抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

閱讀:181          發(fā)布時(shí)間:2020-7-24

【產(chǎn)品名稱】

通用名:雞傳染性法氏囊抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

英文名:Diagnostic Kit For Antibodies To Infectious Bursal Disease Virus  (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒

【預(yù)期用途】 雞傳染性法氏囊是由傳染性法氏囊病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起的以破壞雞的中樞免疫器官——法氏囊為主要發(fā)病機(jī)理的病毒性傳染病,該病病毒損傷法氏囊而導(dǎo)致免疫抑制,使病雞對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、雞球蟲等病原更易感。

    本試劑盒適用于:測(cè)定雞血清中雞傳染性法氏囊病病毒抗體的相對(duì)水平??捎糜谠u(píng)估雞群雞傳染性法氏囊病病毒疫苗免疫狀況分析。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被雞傳染性法氏囊VP2抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)雞血清或血漿中雞傳染性法氏囊病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí),在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和稀釋的待檢血清,經(jīng)溫育后,若樣品中含有雞傳染性法氏囊病毒的抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,在孔中加底物液,與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有傳染性法氏囊病毒抗體

【試劑盒組成】

序號(hào)

名稱

規(guī)格/96T×1

1

酶標(biāo)記物

22ml×1(黃蓋)

2

樣品稀釋液

50ml×1(透明蓋)

3

10X濃縮洗滌液

50ml×1(白蓋)

4

底物液

12ml×1(橙蓋)

5

終止液

12ml×1(藍(lán)蓋)

6

陽性對(duì)照血清

1.0 ml×1(紅蓋)

7

陰性對(duì)照血清

1.0 ml×1(綠蓋)

8

酶標(biāo)板

96T×1

9

蓋板膜

1

10

自封袋

1

11

說明書

1

 

【儲(chǔ)存及有效期】 2~8℃保存,有效期12個(gè)月。

包被板開封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。

2. 用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋(如5ul血清加入195ul樣本稀釋液)稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋成工作洗滌液(如10ml濃縮洗滌液加入90ml的去離子水中)。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性/陽性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。

3. 陰性對(duì)照、陽性對(duì)照孔分別加入陰性對(duì)照血清、陽性對(duì)照血清(不用稀釋)100μl;樣品孔每孔加入稀釋好的待測(cè)樣本100μL。

4.加樣后,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,后一次拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl。蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌,同步驟5。

8.每孔依次加底物液100μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl,充分混勻,終止后讀數(shù)。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,當(dāng)樣本的S/P≥0.2時(shí)判為陽性;樣品S/P值<0.2時(shí)判為陰性

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD值。檢測(cè)結(jié)果有效的條件是陽性對(duì)照孔的平均OD值≥0.6,陰性對(duì)照孔的平均OD值必須<0.15;樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對(duì)水平的高低由S/P值決定,S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:

  S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/(PCx(—)-NCx(—)),其中NCx(—)表示陰性對(duì)照孔平均OD450/630值,PCx(—)表示陽性對(duì)照孔平均OD450/630值。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    1.嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球樣本可能導(dǎo)致假陽性;長(zhǎng)菌的樣本可能導(dǎo)致假陰性。

2.因個(gè)體差異或免疫時(shí)間長(zhǎng)短等因素可能會(huì)出現(xiàn)個(gè)別雞只免疫疫苗后檢測(cè)結(jié)果為陰性。

3.陽性結(jié)果用于感染雞的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他診斷方法和臨床資料進(jìn)行分析。。

【注意事項(xiàng)】

1.使用試劑盒之前,一定要仔細(xì)閱讀說明書。

2.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

3.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。

4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。

6.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

7.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

9.不同批號(hào)試劑組分不得混用。

 

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