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γ-氨基丁酸(GABA)含量試劑盒說明書
閱讀:242 發(fā)布時(shí)間:2023-10-7本試劑盒僅供科研使用
γ-氨基丁酸(GABA)含量試劑盒說明書
(貨號:WS6011F 分光法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 4-氨基丁酸(GABA)廣泛分布在動(dòng)植物體中。在動(dòng)物體內(nèi) GABA 幾乎只存在于神經(jīng) 組織中。在植物中如豆屬、參屬、中草藥等的種子、根莖和組織液中都含有 G A B A, 且與植物的環(huán)境應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。 4-氨基丁酸(GABA)在堿性溶液中與次氯酸鹽和苯酚反應(yīng)生成藍(lán)綠色物質(zhì),通過檢 測該有色物質(zhì)在 645nm 波長處的值,即可得出樣本中 GABA 的含量。 二、試劑盒的組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、可調(diào)式移液槍、水浴鍋、離心機(jī)、 研缽、蒸餾水。 四、γ-氨基丁酸(GABA)含量測定: 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本制備: ① 組織樣本: 稱取約 0.1g 組織樣本加入研缽中,加入 1mL 提取液,在冰上進(jìn)行勻漿,12000rpm, 4℃或室溫離心 10min,取上清液待測。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(104):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:澄清的液體樣本直接測定,若渾濁則離心后取上清檢測。 2、上機(jī)檢測: ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長到 645 nm,蒸餾水調(diào)零。 ② 所有試劑解凍至室溫(25℃)。 ③ 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL) 測定管 對照管 樣本 100 100 試劑一 60 660 試劑二 200 試劑三 400 混勻,沸水?。?/span>95-100℃)10min,冰浴至室溫,呈現(xiàn)藍(lán)綠色顏本試劑盒僅供科研使用 2 色,若渾濁需 12000rpm 離心 5min,取全部澄清上清液轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)中,于 645nm 處讀取各管的 A 值, △A=A 測定-A 對照(每個(gè)樣本需做一個(gè)自身對照)。 【注】1.若測定管的 A 值大于 1,則需將樣本進(jìn)行稀釋(用蒸餾水稀釋),稀釋倍數(shù) D 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 2.若 A 測定-A 對照的差值在零附近徘徊,則可增加樣本取樣量(如增至 0.2g), 則取樣質(zhì)量 W 代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算: 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0086x - 0.0033,x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量(μg),y 為吸光值ΔA。 2、按樣本質(zhì)量計(jì)算: GABA 含量(μg/g 重量)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷(W×V1÷V)×D =1162.8×(ΔA+0.0033) ÷W×D 3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算: GABA 含量(μg/104 cell)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷(500×V1÷V)×D=2.33×(ΔA+0.0033)×D 4、液體中 GABA 含量計(jì)算: GABA 含量(μg/mL)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷V1×D=1162.8×(ΔA+0.0033)×D V---提取液體積,1mL; V1---樣本加入體積,0.1mL; D---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1; W---樣本取樣質(zhì)量; 500---細(xì)胞數(shù)量,萬。 附:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程: 1 標(biāo)準(zhǔn)品母液(2mg/mL):標(biāo)準(zhǔn)品臨用前加 1mL 蒸餾水溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/mL。也可根據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整 標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 按照測定管的加樣體系操作,根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。