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日本生研 假結(jié)核耶爾森菌屬檢測用診斷血清
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一般來說OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白質(zhì)的吸光度。 A260/A280與OD260/OD280的意思是一樣的。A代表吸光值,而OD是光密度值,一個意思。
核酸的純度可以根據(jù)OD260/OD280的比值進(jìn)行判斷,純度高的DNA其OD260/OD280在1.8~2.0之間,低于此范圍表明蛋白質(zhì)含量超標(biāo),高于此范圍表明樣品中含有RNA。
理論上,純的RNA情況下:OD260/OD280的值為2,純的DNA情況下:OD260/OD280的值為1.8。樣品中如果含有蛋白質(zhì)及苯酚,OD260/OD280比值會明顯下降。對于純的樣品,只要讀出260 nm 的A值即可以算出含量。
OD260/OD280=1.9~2.0 RNA居多,純度已經(jīng)很高了。
純DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;<1.6,表明有蛋白質(zhì)、酚等污染)
RNA:1.7 <OD260/OD280<2.0(<1.7時表明有蛋白質(zhì)或酚污染;>2.0時表明可能有異硫氰酸殘存)。
在合成引物時,公司通常要求標(biāo)注合成引物的濃度,通常用OD值表示,如1OD、2OD、5OD等。對于初學(xué)者平說,可能不知道這里OD值代表的意義是什么。
其實OD (optical density)值即光密度值。DNA采用紫外吸光譜法定量,一個OD值的定義為在260nm波長下,1ml體積水溶液,1cm光程,吸光度為1A。
合成引物時,為了確定引物濃度,可以在260nm波長下(OD260)測量吸光度,然后使用光吸收值和微摩消光系數(shù)的倒數(shù)(nmol/OD),通過Beers法則計算出引物濃度。
通常1個OD值的合成引物DNA的質(zhì)量約為33ug,即1 OD260= 33 ug/ml。