醫(yī)療部研究艱難梭菌測(cè)定試劑盒（ELISA）

艱難梭菌（Clostridium difficile）對(duì)氧極為敏感，分離培養(yǎng)較困難．故命名為艱難梭菌。 艱難梭菌屬厭氧性細(xì)菌。厭氧性細(xì)菌是指那些在無(wú)氧條件下要比在有氧環(huán)境中生長(zhǎng)好的細(xì)菌，而人的腸道正好是一個(gè)相對(duì)無(wú)氧的環(huán)境。
醫(yī)療部研究艱難梭菌測(cè)定試劑盒（ELISA）

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醫(yī)療部研究艱難梭菌測(cè)定試劑盒（ELISA）

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醫(yī)療部研究艱難梭菌測(cè)定試劑盒（ELISA）

 測(cè)試原理：

CoproELISA^Tm 值C。艱難梭菌 GDH 是一種用于檢測(cè)人類糞便中 GDH的酶免疫測(cè)定法。

• 分裂的微孔用艱難梭菌 GDH 特異性單克隆抗體包被。
• 將辣根過(guò)氧化物酶（HRP）綴合的單克隆抗 GDH 抗體加入到抗體包被的微孔中。
• 將糞便樣品稀釋在樣品稀釋劑中并加入微孔中。在該步驟中，艱難梭菌 GDH 由 HRP 綴合的抗體標(biāo)記并通過(guò)包被的抗體固定。
• 通過(guò)洗滌除去未結(jié)合的綴合物。
• 加入 TMB-底物，底物被過(guò)氧化物酶水解，得到還原底物的藍(lán)色溶液。
• 加入終止溶液后，藍(lán)色變?yōu)辄S色，應(yīng)由 ELISA 讀數(shù)器在450 / 620nm 波長(zhǎng)下讀取。
• 吸光度與艱難梭菌的水平成比例樣品中的 GDH。

A. 試劑的制備

• 將所有組件和臨床樣本進(jìn)行測(cè)試，使其達(dá)到室溫。確定要

測(cè)試的樣本總數(shù)。除了標(biāo)本外，每次測(cè)試還必須包括以下內(nèi)容：負(fù)控制的一個(gè)孔（用于此目的的樣品稀釋劑）和一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照孔。

• 通過(guò)在密封附近切割一端將微量滴定板從鋁袋中取出。在

96 孔框架中留下所需數(shù)量的條帶（根據(jù)待測(cè)樣品的數(shù)量）。

3. 用雙去離子水或蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液 1/20。例如， 為了制備 1 升洗滌緩沖液，將 50ml 濃縮洗滌緩沖液加入950ml 雙去離子水或蒸餾水中。

B. 樣品處理

• 為每個(gè)待測(cè)樣品設(shè)置一個(gè)稀釋管。

為此，建議使用 1.5 毫升 Eppendorf 管。向每個(gè)管中加入200μl 樣品稀釋劑。標(biāo)記管。

5. *混合（渦旋）糞便樣本以確保充分采樣。

• 成型樣品：使用木制涂抹棒或一次性茶匙將糞便樣品轉(zhuǎn)移

到管中。將約 0.05 至 0.1g 樣品（約 3mm 直徑）轉(zhuǎn)移至樣

品稀釋劑。將樣品稀釋劑中的收集器混合以除去盡可能多 的樣品，并將收集器擠壓在管的側(cè)面以表達(dá)任何殘留液體。液體樣品：將 50μl 樣品轉(zhuǎn)移到管中。確保液體樣本均勻懸

?。u旋）。

• 將稀釋的樣品保存在 2?到 8?C 之間，直到進(jìn)行測(cè)試。

 中文版說(shuō)明書(shū)由健侖生物技術(shù)人員翻譯，具體以英文原版為準(zhǔn)。

 

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 什么是艱難梭菌？

艱難梭菌是一種嚴(yán)格的條件致病菌，也就是說(shuō)，常規(guī)的厭癢環(huán)境培養(yǎng)艱難梭菌無(wú)法生長(zhǎng)，必須在*的厭氧環(huán)境下才能培養(yǎng)出艱難梭菌。艱難梭菌常發(fā)病于院內(nèi)感染，通常是病人大量使用抗生素引起的條件性感染，住院病人大量使用氨芐西林、喹諾酮類藥物引起腸道菌群失調(diào)，從而艱難梭菌大量生長(zhǎng)繁殖，繼而出現(xiàn)偽膜性腸炎和抗生素相關(guān)性腹瀉癥狀的臨床表現(xiàn)。腸道菌群失調(diào)，艱難梭菌大量繁殖產(chǎn)生細(xì)菌毒素，破壞腸黏膜，導(dǎo)致腸粘膜壞死，且出現(xiàn)水樣腹瀉，或者是棕褐色的腹瀉，治療上補(bǔ)充水、電解質(zhì)，防止平衡紊亂，可以口服萬(wàn)古霉素，或者是靜脈注射抗物萬(wàn)古霉素。所以說(shuō)艱難梭菌，重要的不是在于治療，而是在預(yù)防，也就是在醫(yī)院治療時(shí)需要根據(jù)敏感的細(xì)菌選用抗生素，防止抗生素濫用導(dǎo)致艱難梭菌的生長(zhǎng)繁殖引起院內(nèi)感染。