艱難梭菌實驗檢測試劑（酶聯(lián)法）

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艱難梭菌實驗檢測試劑（酶聯(lián)法）

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艱難梭菌實驗檢測試劑（酶聯(lián)法）

 測試原理：

CoproELISA^Tm 值C。艱難梭菌 GDH 是一種用于檢測人類糞便中 GDH的酶免疫測定法。

• 分裂的微孔用艱難梭菌 GDH 特異性單克隆抗體包被。
• 將辣根過氧化物酶（HRP）綴合的單克隆抗 GDH 抗體加入到抗體包被的微孔中。
• 將糞便樣品稀釋在樣品稀釋劑中并加入微孔中。在該步驟中，艱難梭菌 GDH 由 HRP 綴合的抗體標記并通過包被的抗體固定。
• 通過洗滌除去未結(jié)合的綴合物。
• 加入 TMB-底物，底物被過氧化物酶水解，得到還原底物的藍色溶液。
• 加入終止溶液后，藍色變?yōu)辄S色，應(yīng)由 ELISA 讀數(shù)器在450 / 620nm 波長下讀取。
• 吸光度與艱難梭菌的水平成比例樣品中的 GDH。
•  

    程序手冊摘要

           加入 50μlHRP-Conjugate（即用型）

           加入 100μl 陰性對照（樣品稀釋劑），100μl 陽性對照和 100μl 稀釋樣品

蓋板并在 37℃，100％濕度下孵育 50 分鐘

用洗滌緩沖液（300μl）洗滌 5 次

加入 100μlTMB-底物

蓋上蓋板并在室溫下孵育 15 分鐘

加入 100μl 終止液

讀取 OD 450 / 620nm 處的吸光度

       解釋結(jié)果

中文版說明書由健侖生物技術(shù)人員翻譯，具體以英文原版為準。

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致病性：

艱難梭菌是一種厭氧生長的革蘭陽性梭狀產(chǎn)毒芽孢桿菌，

為人類腸道中的正常菌群，抗生素的應(yīng)用可導(dǎo)致該菌過度生長。自1978年開始，艱難梭菌被認為與抗生素相關(guān)性腹瀉有關(guān)，曰前認為25%的抗生素相關(guān)性腹瀉由艱難梭菌引發(fā)。隨著廣譜抗菌藥物的廣泛使用，在范圍內(nèi)，艱難梭菌相關(guān)性腹瀉發(fā)生率不斷升高，近年來出現(xiàn)暴發(fā)流行，其流行菌株發(fā)生基因變異，產(chǎn)生毒素的能力增加，患者病死率及病情復(fù)發(fā)率升高，已引起醫(yī)學界的重視。

艱難梭菌可產(chǎn)生兩種毒素：腸毒素和細胞毒素。腸毒素能趨化中性粒細胞浸潤回腸腸壁，釋放細胞因子，導(dǎo)致腸道大量失水和出血性壞死。細胞毒素能解聚肌動蛋白，損壞細胞骨架，導(dǎo)致局部腸壁細胞壞死，有直接損傷腸壁作用。