DH5α感受態(tài)細(xì)胞

DH5α Chemically Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格:

 DH5α感受態(tài)細(xì)胞基因型:
F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
DH5α感受態(tài)細(xì)胞簡要說明:
CMbio DH5α菌株是實(shí)驗(yàn)室最常用的感受態(tài)細(xì)胞。 缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍(lán)、白斑篩選。DH5α菌株的缺點(diǎn)是生長緩慢，37℃需培12-14小時(shí)才能看見克?。蝗缧杓涌煸囼?yàn)速度，請選用TG1，Mach1-T1，XL10-Gold等生長速度快的感受態(tài)細(xì)胞
列DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率約1×10⁹cfu/μg。
 DH5α感受態(tài)細(xì)胞操作說明：

1. CMbio DH5α感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)              
  抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少17h。

 DH5α感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.  CMbio 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
2.  混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

   3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

 DH5α感受態(tài)細(xì)胞其他推薦：