貨號: | CM-6038G |
供應(yīng)商: | 上海淳麥 |
數(shù)量: | 1000只 |
英文名: | TOP10F´ Chemically Competent Cell |
保質(zhì)期: | 1年 |
保存條件: | 零下80度 |
規(guī)格: | 20*100ul |
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞基因型:
F- ompT hsdS(rB-mB-) gal dcm(DE3)pLysS Camr
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞簡要說明:
BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞攜帶 pLysS質(zhì)粒,具有氯霉素抗性。
pLysS含有表達(dá) T7 溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá),適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。
該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶), BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/μg。
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞操作說明:
- 取100μl冰上融化的 L21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置 25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
- 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。
- 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞注意事項:
- 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
- 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。
- 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
- 誘導(dǎo)時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。
- 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。