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BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞

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更新時間:2024-12-23 21:53:43瀏覽次數(shù):717次

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上海淳麥生物科技有限公司在感受態(tài)細(xì)胞的研發(fā)方面,實力雄厚,擁有了克隆、表達(dá)、酵母和農(nóng)桿菌4大類,共計百余種感受態(tài)細(xì)胞。在電擊感受態(tài)方面,擁有了大腸桿菌 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞和農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)種類,極大提高了客戶在轉(zhuǎn)基因以及文庫構(gòu)建方面的成功率。
貨號:CM-6038G
供應(yīng)商:上海淳麥
數(shù)量:1000只
英文名:TOP10F´ Chemically Competent Cell
保質(zhì)期:1年
保存條件:零下80度
規(guī)格:20*100ul

 

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞基因型:

F- ompT hsdS(rB-mB-gal dcm(DE3)pLysS Camr

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞簡要說明:

 BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞攜帶 pLysS質(zhì)粒,具有氯霉素抗性。
pLysS含有表達(dá) T7 溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá),適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。
該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶), BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/μg。
 

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞操作說明:

  1.  100μl冰上融化的 L21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置 25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

  1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YTLB),混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT LB培養(yǎng)基上。

  1. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

 

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞注意事項:

  1.   感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
  2.  混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。
  3.  轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
  4.  誘導(dǎo)時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。
  5.  為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

6. BL21(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質(zhì)粒,除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外,其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml氯霉素,以防質(zhì)粒丟失。

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