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液相色譜法測定雷公藤片中雷公藤內酯醇的含量及含量均勻度
閱讀：799 發(fā)布時間：2019-1-16
摘要
采用液固萃取—液相色譜法測定雷公藤片中雷公藤內酯醇的含量，方法靈敏、準確，重現(xiàn)性好，回收率為98.8%?？疾炝死坠倨⒘坑行С煞掷坠賰弱ゴ嫉木鶆蛐?，為進一步提高雷公藤片的質量提供了依據(jù)。
雷公藤片是以雷公藤根提取物(有效部位)為原料制備的浸膏片，是治療類風濕性關節(jié)炎的有效藥物，其微量有效成分雷公藤內酯醇是其質量控制指標。 雷公藤內酯醇在片劑中的含量與臨床療效和毒副作用相關，因此，考察其在片劑中的均勻性對臨床用藥和進一步提高雷公藤片內在質量很有必要。雷公藤片質量控制 報道有薄層色譜掃描法。我們采用液固萃取法預處理樣品，用液相色譜法測定了雷公藤片中雷公藤內酯醇的含量及含量均勻度，方法靈敏度高，操作簡便，重現(xiàn) 性好。
1、實驗部分
1.1 儀器與試藥日本島津LC—6A液相色譜儀；CR—3A數(shù)據(jù)處理機；SPD—6AV可見—紫外檢測器；雷公藤內酯醇對照品(自制，熔點 226～229℃，紫外、紅外、質譜、核磁共振4譜數(shù)據(jù)與文獻一致，液相色歸一化法測定含量為98.88%)；雷公藤片為市售；甲醇(優(yōu)級純，北京化 工廠)；重蒸水；PT—中性氧化鋁預處理柱(河北津楊濾材廠)；其它化學試劑均為分析純。
1.2 試樣的預處理取雷公藤片適量，置5mL具塞離心管中，精密加甲醇—乙酸乙酯—石油醚(1∶1∶1)混合溶媒4mL，超聲提取10min，靜置10min， 精密吸取上清液0.2mL上樣于PT—中性氧化鋁預處理柱(預柱預先用5mL洗脫液沖洗備用)，用8mL上述混合溶媒洗脫，揮干溶劑，用甲醇0.2mL溶 解，得供試品溶液。
1.3 液相色譜條件色譜柱：Shim-PackCLCODS6.0mm×150mm，預柱：ODS4.6mm×20mm，10μm(大連依利特科學儀器 有限公司)，流動相：甲醇—磷酸鹽緩沖液(pH4.0)(43∶57，V/V)，流速1mL/min，柱溫30℃，檢測波 長：224nm，0.04AUFS。在上述條件下，雷公藤內酯醇保留時間為15min，
1.4 標準曲線的繪制
1.4.1 標準溶液的配制精密稱取雷公藤內酯醇對照品適量，用甲醇溶解，配制成濃度為52mg/L的標貯液。精密吸取標貯液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL于10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
1.4.2 標準曲線的繪制取各濃度的雷公藤內酯醇標準溶液各10μL，按以上色譜條件進行測定。以進樣量(μg)和相應的峰高(h)作標準曲線，其回歸方程為：
h=1.516C-0.015r=0.9999
在0.013～0.41μg范圍內線性關系良好。
1.5 加樣回收率試驗稱取已知含量的雷公藤片粉末100mg(相當于1片片重)一式6份，分別置10mL具塞離心管中，其中3份精密加入雷公藤內酯醇標準溶液 (25.86mg/L)1mL，另3份加入2mL，按試樣預處理項下操作，進樣10μL進行色譜測定，回收率(n=3)分別為98.4%、 99.2%，RSD分別為1.9%、1.6%，平均回收率為98.8%。
1.6 精密度試驗將雷公藤內酯醇標準溶液(20.69mg/L)進樣10μL，重復進樣6次，RSD為2.0%。
1.7 樣品測定
1.7.1 含量測定取本品20片，去糖衣，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于1片片重)，按樣品預處理項下處理后，進樣10μL進行色譜測定，用外標法計算含量。
1.7.2 含量均勻度考察上述3個批號雷公藤片每批號隨機取10片，去糖衣，分別置5mL具塞離心管中，逐片按樣品預處理項下處理后，進樣10μL進行色譜測定，用 外標法計算含量。按中國藥典1995年版附錄XE方法計算，含量均勻度范圍(相當于標示量)分別為：57%～92%、44%～92%、 102%～137%，A+1.8S值分別為43.6、49.5、31.3。
2、討論
2.1 雷公藤片經超聲提取后，提取液呈棕紅色，直接進樣會污染色譜柱，且分離效果差。采用PT—中性氧化鋁預處理柱處理樣品后，雷公藤內酯醇被*洗脫，而極性 雜質滯留在柱上，使試樣得到預分離和凈化。此法較常規(guī)色譜柱具有重現(xiàn)性好，快速、簡便，洗脫劑用量少等優(yōu)點。
2.2 本實驗進行了甲醇—水、甲醇—磷酸鹽緩沖液不同配比、不同pH值(2.5～7.0)、不同柱溫(20～30℃)的摸索試驗，結果表明，甲醇—磷酸鹽緩沖液(pH4.0)(43∶57)的系統(tǒng)分離效果更好。
2.3 雷公藤內酯醇為雷公藤根提取物(浸膏)中生物活性高的微量有效成分和主要毒性成分，以其為質控指標可以控制雷公藤片的質量。本實驗雷公藤片的均勻性考察結 果表明，市售雷公藤片中雷公藤內酯醇的含量存在不均勻性。我們認為生產廠家必須嚴格控制生產過程的各個環(huán)節(jié)，盡可能地提高雷公藤片的含量均勻性，以保證制 劑的質量，使臨床用藥安全、穩(wěn)定、有效。(來源：中國色譜技術網(wǎng))