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總皂苷的測(cè)定方法（分光光度法）
閱讀：5270 發(fā)布時(shí)間：2019-1-16
本方法適用于功能性食品中總皂苷的測(cè)定
本方法人參皂苷Re的低檢出量為2μg/mL
一、方法提要
樣品中總皂苷經(jīng)提取、PT—大孔吸附樹(shù)脂柱預(yù)分離后，在酸性條件下，香草醛與人參皂苷生成有色化合物，以人參皂苷Re為對(duì)照品，于560nm處比色測(cè)定。
二、儀器
1.722分光光度計(jì)。
2.PT—大孔吸附樹(shù)脂柱(河北省津楊濾材廠)。
3.超聲波振蕩器。
三、試劑
1.甲醇(分析純)
2.乙醇(分析純)
3.人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)
4.5%香草醛溶液：稱(chēng)取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL
5.高氯酸(分析純)
6.冰乙酸(分析純)
7.人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人參皂苷Re2.0mg
8.重蒸水
四、測(cè)定步驟
1.樣品處理：
(1)固體樣品
稱(chēng)取1.0g左右樣品于100mL燒杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超聲波振蕩30min，再定容至50mL，搖勻，放置，吸取上清液1.0mL揮干后以水溶解殘?jiān)?，進(jìn)行柱分離
(2)液體樣品
含乙醇的酒類(lèi)樣品：準(zhǔn)確吸取1.0mL樣品放于蒸發(fā)皿中，蒸干，用水溶解殘?jiān)?，用此液進(jìn)行柱層析；非乙醇類(lèi)液體樣品：準(zhǔn)確吸取1.0mL樣品(如濃度高或顏色深，需稀釋一定體積后再取1.0mL)直接進(jìn)行柱分離
2.柱層析
以PT—大孔吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行層析分離，準(zhǔn)確吸取上述已處理好的樣品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液，再用20mL85%乙醇洗脫總皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，以此作顯色用
3顯色
在上述已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL 5%香草醛冰乙酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)芙?，再?.8mL高氯酸，混勻后移入l0mL比色管中，塞緊蓋子于60℃以下水浴上加溫15min取出，冷卻后準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0mL，搖勻后以1.0cm比色皿、于560nm處與人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)管同時(shí)比色
4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液(2.0mg/mL)0、20、40、60、80、100μL(相當(dāng)于人參皂苷Re0、40、80、120、160、200μg)，于10mL比色管中，用氮?dú)獯蹈?，?.(3)顯色步驟測(cè)定吸光度。并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
人參總皂苷濃度為20～200μg/mL之間與吸光度值呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r)0.999
五、結(jié)果計(jì)算
式中 X——樣品中總皂苷(以人參皂苷Re計(jì))(g
m——試樣質(zhì)量或試液體積(g或mL)
V1——樣品提取液總體積(mL)
V2——樣品提取液測(cè)定用體積(mL)
m1——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得待測(cè)液中人參皂苷Re量(μg)
六、注釋
1.人參系五加科植物是人參Panax ginseng C A Meyer的根，含有多種人參皂苷(ginsenoside)，多數(shù)為達(dá)瑪烷型皂苷，如人參皂苷Ral、Ra2、Rbl、Rb2、Rb3、Re、Rd等；少數(shù)為齊墩果酸型(C型)皂苷，如人參皂苷Re。由于苷元不同，達(dá)瑪烷型皂苷又分為：20S—原人參二醇類(lèi)皂苷(A型)和20S—原人參三醇類(lèi)皂苷(B型)。其中，A型和B型皂苷酸水解后，分別得到人參二醇(Panaxadial)和人參三醇(panaxatriol)。除人參外，五加科的西洋參、三七、刺人參、刺五加和葫蘆科的絞股藍(lán)中亦含有與人參皂苷類(lèi)似的化合物。當(dāng)保健食品原料配方中含有上述多種原料時(shí)，即以本法"總皂苷(以人參皂苷Re計(jì))"報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。
2.對(duì)于人參、西洋參、絞股藍(lán)純品或以其為主要原料加工的保健食品，按《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部第99頁(yè)，以薄層色譜法進(jìn)行鑒定試驗(yàn)，將受試品色譜與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜進(jìn)行比較確定其主要原料后，人參、西洋參制品仍以人參皂苷Re為對(duì)照品進(jìn)行檢測(cè)，而絞股藍(lán)制品以絞股藍(lán)總皂苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所)為對(duì)照品進(jìn)行檢測(cè)，分別以"人參總皂苷"、"西洋參總皂苷"、"絞股藍(lán)總皂苷"報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。
3.回收率：90%～105%