HY5|蛋白質(zhì)長下胚軸5，調(diào)控植物光形態(tài)建成的關(guān)鍵因子

HY5（蛋白質(zhì)長下胚軸5）是一種光調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子，在光照下促進(jìn)光形態(tài)形成。參與藍(lán)光特異性途徑。異二聚體。在根、下胚軸、子葉、葉、莖和花器官中表達(dá)。位于細(xì)胞核內(nèi)。替代名稱：蛋白質(zhì)長亞丙基5，bZIP轉(zhuǎn)錄因子56，AtbZIP56。

艾美捷HY5|蛋白質(zhì)長下胚軸5：

貨號：AS12-1867

免疫原：與KLH偶聯(lián)的肽段，源自擬南芥HY5蛋白序列，UniProt編號：O24646，TAIR編號：AT5G11260。所選肽段在HY5蛋白序列中不保守。

宿主：兔

克隆性：多克隆

純度：免疫原親和純化的血清，溶于pH 7.4的PBS中

形式：凍干粉

數(shù)量：50 µg

復(fù)溶方法：復(fù)溶時加入50 µl無菌水

儲存條件：凍干粉/復(fù)溶后于-20°C保存；復(fù)溶后請分裝，避免反復(fù)凍融。打開管子前請短暫離心，以避免因材料粘附在蓋子或管壁上而導(dǎo)致的損失。

推薦稀釋度：1:500至1:1000（Western Blot）

預(yù)期/表觀分子量：18.5 kDa

已確認(rèn)的反應(yīng)性：擬南芥

預(yù)測的反應(yīng)性：北京白菜

不反應(yīng)的物種：柑橘、大麥、水稻、豌豆、楊樹、番茄、小麥、玉米

額外信息：

該抗體可在本氏煙（Nicotiana benthamiana）中檢測重組HY5蛋白。

在使用內(nèi)源性提取物時，需要使用含有6-8 M尿素的提取和加載緩沖液，以便通過該抗體進(jìn)行檢測，或使用TCA/乙酸乙酯蛋白提取法，如Mechin等（2007）所述。

樣品需在微弱綠光下采集，以避免在采集和提取過程中發(fā)生降解。

應(yīng)用實例：

圖：從7日齡擬南芥幼苗中新鮮提取的10 µg總蛋白，使用三L乙酸和乙酸乙酯（Mechin等，2007）進(jìn)行提取，并用LDS（十二烷基硫酸鋰）樣品緩沖液在70°C下變性10分鐘。蛋白在12%的SDS-PAGE上分離后，通過半干法轉(zhuǎn)印至PVDF膜（孔徑0.2 µm），轉(zhuǎn)印時間為7分鐘。膜用5%脫脂奶粉在4°C下封閉過夜（ON），期間不斷攪拌。膜在1:1000稀釋的一抗中孵育2小時（室溫，RT），期間不斷攪拌，TBS-T緩沖液中進(jìn)行。棄去一抗溶液后，膜短暫沖洗，然后在室溫下用TBS-T洗滌三次，每次15分鐘，期間不斷攪拌。膜在Agrisera匹配的二抗（抗兔IgG辣根過氧化物酶偶聯(lián)抗體，AS09 602，稀釋至1:10,000）中孵育1小時（室溫，RT），期間不斷攪拌。膜按上述方法洗滌后，用化學(xué)發(fā)光檢測試劑顯色2分鐘。曝光時間為100秒。

幼苗在黑暗中生長4天，隨后在連續(xù)光照下（~120 µE）生長3天。幼苗整體研磨以提取蛋白。

感謝澳大利亞國立大學(xué)（ANU）科學(xué)學(xué)院生物研究學(xué)院Pogson實驗室的侯鑫提供。

HY5|蛋白質(zhì)長下胚軸5文獻(xiàn)參考：
Yao et. al. 2024).Cooperative transcriptional regulation by ATAF1 and HY5 promotes light-induced cotyledon opening in Arabidopsis thaliana. Sci Signal. 2024 Jan 2;17(817):eadf7318.  

Liu et al. (2024). Phosphorylation of Arabidopsis UVR8 photoreceptor modulates protein interactions and responses to UV-B radiation. Nat Commun. 2024 Feb 9;15(1):1221.doi: 10.1038/s41467-024-45575-7.  

Cazzonelli et al. (2019). A cis-carotene derived apocarotenoid regulates etioplast and chloroplast development.

Lee et al. (2017). The F-box protein FKF1 inhibits dimerization of COP1 in the control of photoperiodic flowering. Nat Commun. 2017 Dec 22;8(1):2259. doi: 10.1038/s41467-017-02476-2.

Sinclair et al. (2017) Etiolated Seedling Development Requires Repression of Photomorphogenesis by a Small Cell-Wall-Derived Dark Signal. Curr Biol. 2017 Nov 20;27(22):3403-3418.e7. doi: 10.1016/j.cub.2017.09.063.