微生物實驗室質(zhì)控準(zhǔn)則

質(zhì)量控制相關(guān)定義
質(zhì)量控制：滿足質(zhì)量要求的操作技術(shù)和活動。
質(zhì)量保證：為了滿足實驗室質(zhì)量要求 ，制定相應(yīng)的計劃，實施證明（記錄）所進(jìn)行的一系列的系統(tǒng)活動
外部質(zhì)量控制：通過互相校準(zhǔn)和/或檢驗對實驗室的操作和結(jié)果所進(jìn)行的控制
內(nèi)部質(zhì)量控制：實驗室內(nèi)部采取的以對比分析、跟蹤以及相關(guān)方法，對實驗室工作的連續(xù)性控制計劃。
質(zhì)量手冊：是描述質(zhì)量系統(tǒng)元素的文件或文件的集合。
  實驗室要求 
組織：按國家實驗室認(rèn)可的概念，是指一個能夠承擔(dān)法律責(zé)任的實體。這里所指的是實驗室（微檢室）內(nèi)建立的質(zhì)量管理的保證體系。
人員
房屋      滿足檢測工作需要。
設(shè)備
  人員要求
實驗室人員的分類：管理人員、技術(shù)人員、技術(shù)支持人員等。
相應(yīng)崗位的人員，應(yīng)具備相應(yīng)的技術(shù)能力，相應(yīng)的技術(shù)能力證明（證書及證件）。
微生物檢驗室因有相應(yīng)技術(shù)能力的人負(fù)責(zé)室內(nèi)的技術(shù)工作。并設(shè)立質(zhì)量監(jiān)督員。
  房屋條件要求 
房屋要求：具有適宜、足夠?qū)挸?、通風(fēng)有良好的照明。
房屋內(nèi)墻面及地等應(yīng)采用易于清潔的材料，保持房間清潔。
房間的設(shè)置，以其開展的工作內(nèi)容加以分用，設(shè)立專用房間。
房間的大小還應(yīng)根據(jù)從事實驗人員的進(jìn)入數(shù)量上加以考慮。
  環(huán)境設(shè)施要求
專用房間的溫濕度控制與記錄（樣品存放室）
特殊環(huán)境的微生物指標(biāo)控制與記錄（無菌室等）
專用工作室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和定期的檢測校準(zhǔn)程序。（潔凈室等）
特殊環(huán)境中的專用設(shè)施質(zhì)量控制應(yīng)符合有關(guān)要求（凈化工作臺）
  環(huán)境設(shè)施的相關(guān)技術(shù)指標(biāo)
凈化室、凈化工作區(qū)域、潔凈環(huán)境按國家及部頒標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測。
空氣潔凈度指標(biāo)：


檢測頻率及檢測方法。一次/月；空氣細(xì)菌檢測（沉降法）。

設(shè)備/儀器要求總則
滿足開展相關(guān)檢測項目的要求。
制定相關(guān)設(shè)備/儀器的作業(yè)指導(dǎo)書。
設(shè)備/儀器的檢定校準(zhǔn)，特別室新購儀器的檢定。設(shè)備/儀器分別以送檢、送校、自檢、自校表示其所檢定的狀態(tài)。。
設(shè)備/儀器的運(yùn)行檢查計劃。
設(shè)備/儀器的運(yùn)行狀況及適用記錄
維修后設(shè)備/儀器的再校準(zhǔn)或檢查，并具有完整的檢查記錄。
 設(shè)備控制和程序
微生物檢驗常用需監(jiān)控的設(shè)備和儀器
1培養(yǎng)箱（生化培養(yǎng)箱或CO2培養(yǎng)箱等）、干燥箱、高壓滅菌鍋、凈化工作臺、pH計、 冰箱，（低溫冰箱或冷柜）溫度計、紫外燈、顯微鏡、離心機(jī)、天平、。
2小計量容器
3微生物測定儀器、微生物檢定儀器、空氣采樣器、酶標(biāo)儀專用等。
 溫度計
實驗室必須要有工作溫度計和參照溫度計。
工作溫度計：用于日常溫度檢查。
參照溫度計：用于校正工作的溫度計。
溫度計運(yùn)行檢查：一般可采用一次/半年的運(yùn)行檢查。
日常檢查、校準(zhǔn)檢查、運(yùn)行檢查等都應(yīng)做好相應(yīng)的技術(shù)記錄。
  培養(yǎng)箱、水浴箱和冰箱的溫度控制
根據(jù)培養(yǎng)物性質(zhì)及溫度要求，培養(yǎng)箱應(yīng)分別設(shè)置（以用途和溫度分）
培養(yǎng)箱的溫差要求，一般顯示值與實測值相差不大于±1℃，箱體內(nèi)各點(diǎn)溫差（內(nèi)部的溫度均衡性）以及溫度波動同樣不大于±1℃。
溫度監(jiān)控方法：可將工作溫度計置甘油中，放入待測箱體內(nèi)，觀察工作溫度計的溫度，最好1-2次/天監(jiān)控記錄.

高壓滅菌鍋的溫度控制（一）
高壓滅菌鍋；生物指示菌法（常用）、化學(xué)變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計等方法進(jìn)行檢測。
生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。
高壓滅菌鍋由專人按作業(yè)指導(dǎo)書操作，并做好每一次的作業(yè)記錄。
高壓滅菌鍋使用時，內(nèi)置物品不能太多，單位體積內(nèi)的內(nèi)容物（每瓶內(nèi)的培養(yǎng)基）不能太多。同時應(yīng)注意內(nèi)容物不同耐受溫度?？偟谋┞稌r間最好不要超過45min。
  高壓滅菌鍋的溫度控制（二）
高壓滅菌鍋日常工作記錄應(yīng)包含以下信息：高壓滅菌的材料、開始時間、壓力/溫度、取出時間、高壓滅菌膠帶的顏色變化（日常常用無菌培養(yǎng)代替）
高壓滅菌鍋溫度波動范圍：110，115和121±2℃。
高壓滅菌鍋校準(zhǔn)周期一般在半年。
  干燥滅菌箱溫度控制 
干燥滅菌箱日常工作記錄中應(yīng)包括以下信息：開始的時間、到達(dá)滅菌溫度時的時間、取出的時間（或關(guān)閉時間）。
干燥滅菌箱的溫度校準(zhǔn)；用參考溫度計進(jìn)行溫度測試。
干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5 ℃或180 ±5 ℃。前者為滅菌2h，后者為30min。
干燥滅菌箱校準(zhǔn)時間一般為一年。
  培養(yǎng)基配制用蒸餾水的控制
對于蒸餾水器來說：按設(shè)備說明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。
檢測要求：西歐標(biāo)準(zhǔn)為微生物檢驗用蒸餾水的特定電導(dǎo)率＜0.5ms/m；細(xì)菌數(shù)＜50cfu/ml。我們?nèi)粘Ｓ玫臉?biāo)準(zhǔn)為 ＜10ms/m，未見有細(xì)菌指標(biāo)。
檢測頻率：1次/每月。
蒸餾水定點(diǎn)供應(yīng)，并做好相應(yīng)的質(zhì)量控制，記錄檢測結(jié)果。
  天平的管理
天平放置要求：無振動、無氣流影響及水平臺面上。
天平要有使用及運(yùn)行檢查記錄。
天平作為計量儀器是列入國家強(qiáng)制檢定的范圍，一般1次/年進(jìn)行檢定。
運(yùn)行檢查頻率按運(yùn)行計劃或按產(chǎn)品（天平生產(chǎn)廠家）給出的標(biāo)準(zhǔn)重量單位進(jìn)行對照。

容積的控制（一）
通過一定的控制方法，保證高壓滅菌后的稀釋劑滿足標(biāo)準(zhǔn)用量。
采取稱中法來測定蒸發(fā)量，體積100ml的稀釋劑起重量為101g。高壓夠體積偏差不得超過1%。
采取先高壓后定量分裝，可避免因高壓造成的體積誤差。
對保存的定量液體應(yīng)在使用時，注意補(bǔ)充容積。
  容積的控制（二）
吸管的控制：通過小計量容器校準(zhǔn)，后使用。
小計量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，校準(zhǔn)周期一般為1-2次/一年。
小計量容器日常使用檢查可每周進(jìn)行一次，包括容器的完整性。并做好相應(yīng)的記錄。
  pH計
pH計使用前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)。
緩沖液使用有效期：PH4.00      約1年 
                  PH7.00        約6個月
                  pH9.00       約6個月
pH計的維護(hù)：電極外表的定期清洗；
                         電極敏感性檢測及極性恢復(fù)。
  凈化工作臺的控制
水平流凈化工作臺工作區(qū)域，要求潔凈度為100級?？諝獬两?0min，細(xì)菌數(shù)＜1個/皿。垂直流凈化工作臺，細(xì)菌數(shù)＜0.49個/皿.
凈化工作臺運(yùn)行檢查頻次：1次/月主要是細(xì)菌沉降檢測。
凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進(jìn)行粒子與細(xì)菌沉降檢測。 
  紫外線燈的控制
檢測方法：儀器測試法和生物測試法。前者是通過專用儀器檢測紫外燈管發(fā)射的紫外光強(qiáng)度。國家消毒技術(shù)規(guī)范中表明在距離照射無1米處，要求其強(qiáng)度為90。
生物測試法：采用一定的菌培養(yǎng)物，經(jīng)一定比例稀釋，菌量控制在200-250個/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射，2min，同時設(shè)置普通光源的對照組，后置37℃48h，計算其殺滅率。要求殺滅率達(dá)99%。
 顯微鏡的控制
顯微鏡應(yīng)制定作業(yè)指導(dǎo)書，日常維護(hù)記錄及自校記錄。
顯微鏡應(yīng)置于無振動，避免灰塵，防潮等要求的環(huán)境。
  其它微生物檢測專用儀器的控制
細(xì)菌鑒定儀、酶標(biāo)儀等設(shè)備，工作中常用陽性對照檢測其功能的正常性。
儀器的檢定則按有關(guān)的部門檢定或按自校作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行。
儀器的使用登記、校準(zhǔn)計劃、校準(zhǔn)記錄等文件存檔。
儀器專人使用、操作者應(yīng)取得相應(yīng)的崗位培訓(xùn)合格，持證上崗。

  培養(yǎng)基質(zhì)量控制  
正確進(jìn)行培養(yǎng)基質(zhì)量控制，并作為一項經(jīng)常性的工作，建立完整的檢驗資料，是實驗室今后通過相應(yīng)級別的認(rèn)證，在整個檢驗質(zhì)量控制體系中所必須具備的文件資料。 
現(xiàn)有的依據(jù)：衛(wèi)生部1993年發(fā)布的食品檢驗用干燥培養(yǎng)基生產(chǎn)質(zhì)量控制。但這個標(biāo)準(zhǔn)不完善。
 培養(yǎng)基的分類
按其成分分類：有天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。
按用途分類：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基及厭氧培養(yǎng)基。
按培養(yǎng)基的形態(tài)分類：液體培養(yǎng)基、流體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基及固體培養(yǎng)基。
根據(jù)培養(yǎng)基的劑型不同分類：新鮮配制培養(yǎng)基和干燥培養(yǎng)基兩種。
 檢驗中常用的培養(yǎng)基
水質(zhì)檢測用培養(yǎng)基：7種
化妝品檢驗用培養(yǎng)基 ：8種
食品檢驗用培養(yǎng)基 ：常用的有3 7 種，110種被列入了GB4789中，其中生化試驗培養(yǎng)基23種，一般和專用培養(yǎng)基89種。
食品、化妝品及涉水產(chǎn)品等產(chǎn)品微生物檢驗常規(guī)項目中所用的增菌分離培養(yǎng)基有所不同，對于菌種鑒定所用的培養(yǎng)基，各類產(chǎn)品分離的菌種其鑒定所用的培養(yǎng)基基本相同。
 常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 （一）
檢驗項目與方法：對新批號的干燥培養(yǎng)基物理、化學(xué)及生物學(xué)指標(biāo)鑒定
A：感官（外觀）研細(xì)程度和顏色（溶解前后），透明度，雜質(zhì)等；
B：PH測定，按各種培養(yǎng)基要求的PH±0.2，蒸餾水的PH應(yīng)在6.4-7.0之間。
C：生物學(xué)指標(biāo)檢定，被檢培養(yǎng)基相應(yīng)細(xì)菌生長率測試；菌落大小及特征的檢測。
 常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 （二）
生長率測試：適用與液體和固體培養(yǎng)基：將菌培養(yǎng)液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進(jìn)行平板計數(shù)或接種被檢的培養(yǎng)基試管，同時以按相關(guān)的培養(yǎng)基國標(biāo)配方新鮮配制的培養(yǎng)基進(jìn)行對照。不低與10%。
 常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 （三）
菌落大小測試：劃線分離測試菌，取10個菌落測量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的培養(yǎng)基無統(tǒng)計學(xué)差異。
 常用培養(yǎng)基檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌株
甲型副傷寒沙門菌50002         傷寒沙門菌 50096
   乙型副傷寒沙門茵                   鴨沙門茵50083
   鼠傷寒沙門氏菌                  痢疾志賀菌1型5157O
福氏志賀菌2              大腸埃希菌25922（ATCC）
金黃色葡萄球菌25923（ATCC 普通變形桿菌
肺炎克雷伯菌肺炎亞種 弗勞地枸櫞酸桿菌4197
綠膿桿菌27853（ATCC）    副溶血性弧菌
  常用培養(yǎng)基質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 
外觀和理化標(biāo)準(zhǔn)：
干粉顏色：淡黃色粉末或呈現(xiàn)本培養(yǎng)基*的顏色
溶解后培養(yǎng)基色澤：清晰透明（含瓊脂除外）淡黃色或*的色澤；
滅菌后的培養(yǎng)基PH：7.2±2℃為多；個別弧菌檢驗用培養(yǎng)基pH值偏高為：8.0 ±2℃
生物學(xué)指標(biāo)：菌落特征及菌落大小 。
  培養(yǎng)基保存環(huán)境
制成的培養(yǎng)基保存環(huán)境為4℃冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存， 
干燥培養(yǎng)基干粉含有活性物質(zhì)、遇熱易分解的物質(zhì)應(yīng)仔細(xì)查看存放條件，多數(shù)也須放在2-8 ℃條件保存。
有的培養(yǎng)基則以存放于10-15 ℃條件為易。如含有高濃度膽鹽的培養(yǎng)基。