Heparin Affinity Resin肝素親和樹脂

時間：2019/7/4閱讀：890

肝素親和介質適用于與肝素分子有特異性吸附作用的蛋白分子的分離和純化，例如：凝血因子、抗凝血酶III、生長因子、干擾素以及脂肪酶等。肝素親和介質以瓊脂糖軟膠微球作為基質,采用惠誠生物*的化學鍵和技術固定肝素分子,通過肝素與抗凝血酶III或具有類似結構蛋白分子之間的特異性結合力實現(xiàn)目標蛋白的分離，上海惠誠生物提供肝素親和介質，詳情咨詢上?；菡\生物.

肝素親和介質具有以下特點：

1.親和力好

2.蛋白活性回收率高

3.化學穩(wěn)定性好

上海惠誠生物肝素親和介質產(chǎn)品說明書如下：

一、產(chǎn)品簡介

肝素（Heparin）是一種含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子III、凝血酶、類凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII，也能和大腸桿菌表達的人白介素、人前列腺生長因子、重組人血管內皮生長因子、軟骨生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、重組人酸性成纖維細胞生長因子、重組肝細胞生長因子、重組鼠肝素輔因子II、重組人血小板第四因子、重組人內皮抑素、重組人角質細胞生長因子等生物大分子結合，所以肝素親和介質可以用于這類物質的純化。肝素親和層析介質以交聯(lián)瓊脂糖為基質，采用環(huán)氧活化工藝，將肝素偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上，該填料具有很高的物理化學穩(wěn)定性，配基不易脫落，使用壽命長，使用方便，應用廣泛。

二、產(chǎn)品特性

參數(shù)	指標
基質	瓊脂糖凝膠微球
配基	Heparin
形狀	球形
介質平均粒徑	90 μm (50~160)
配基密度	3.5mg heparin/ml wet gel
動態(tài)載量	2mg AT III/ml wet gel
高流速（25℃）	500 cm/h
高耐壓	0.3 MPa (3 bar)
pH穩(wěn)定性	4~12（長時間）；4~13（短時間）
保存	4~8 oC（0.05M乙酸鈉+20%乙醇）

三、操作步驟

肝素親和層析介質廣泛用于抗凝血因子III、凝血酶、類凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII等生物大分子的分離純化。層析操作通常包括裝柱、平衡、進料、淋洗、洗脫、再生等步驟。

1.平衡：用5~10CV的平衡緩沖液（20-50mM PB或Tris/HCl，pH 7.4-8.0，可加入0.15M NaCl抑制非特異吸附）平衡層析柱，至流出液電導和pH不變（與平衡液一致）。

2.進料：樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應經(jīng)離心或微濾處理。進料量根據(jù)介質的載量和料液中目標蛋白的含量計算。

3.淋洗：上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線。

4.洗脫：用洗脫緩沖液（20-50mM PB或Tris/HCl+1-2M NaCl，pH7.4-8.0，NaCl濃度需要根據(jù)目標蛋白的結合力進行適當調整）洗脫，收集流出液。可采用線性梯度或階越式梯度洗脫。

5.原位清洗：為了避免不同樣品間的相互干擾，或者當介質污染比較嚴重時（反壓增加），需要對介質進行在位清洗。

（1）對于以離子鍵結合的蛋白，可用2~3 CV以上的2M NaCl清洗，并用3 CV以上的純水沖洗。（2）對沉淀或變性蛋白蛋白，可用0.1M NaOH清洗（1~2h），并用3~10 CV平衡液和3 CV以上的純水沖洗。也可用6M Gua-HCl或8M Urea清洗（0.5~1h）（3）對疏水性結合的蛋白，可用0.1~0.5%的非離子去污劑清洗（1~2h），并用3~10 CV的純水沖洗。

其它注意事項：在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。

四、具體應用實例

轉基因羊奶中抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）的分離純化

層析柱：2.5 cm × 1.0 cm I.D.，CV=2 mL

樣品：預處理的轉基因羊奶（0.45 µm濾膜過濾，上樣10 mL）

平衡緩沖液（A）：50 mM Tris/Hcl, pH 7.2

洗脫緩沖液（B）：50 mM Tris/Hcl+1 M NaCl, pH 7.2

流速：1 mL/min

肝素親和介質——層析介質西寶生物 400 021 8158

圖1 Heparin QZT 6FF親和層析譜圖圖2 肝素親和層析所得樣品SDS-PAGE圖

（1. 惠誠介質的洗脫峰P1；2.惠誠介質的洗脫峰P2；3. 進口介質的洗脫峰P1；4. 進口介質的洗脫峰P2）

五、特色服務

（1）提供介質篩選及工藝開發(fā)的咨詢。

（2）接受客戶委托開發(fā)各種分離介質和分離工藝。

（3）按客戶要求提供各種規(guī)格的預裝柱。

（4）為客戶提供專業(yè)的售前和售后服務。

六、層析介質及預裝柱產(chǎn)品訂購指南

親和層析介質及預裝柱

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	備注
His標簽蛋白純化介質（IDA）	11-0010-01	5ml	瓊脂糖基質，高載量（默認Ni²⁺，若需螯合其他離子，請告知銷售人員）
	11-0010-02	50ml
	11-0010-03	250ml
	11-0010-04	500ml
	11-0010-05	1000ml
His標簽蛋白純化柱（IDA）	11-0020-01	1ml
His標簽蛋白純化柱（IDA）	11-0020-02	5ml
His標簽蛋白純化介質（NTA）	11-0011-01	5ml	瓊脂糖基質，低脫落，可耐受DTT，β-Me等還原劑（默認Ni²⁺，若需螯合其他離子，請告知銷售人員）
	11-0011-02	50ml
	11-0011-03	250ml
	11-0011-04	500ml
	11-0011-05	1000ml
His標簽蛋白純化柱（NTA）	11-0021-01	1ml
His標簽蛋白純化柱（NTA）	11-0021-02	5ml
His標簽蛋白純化介質（IMAC）	11-0012-01	5ml	瓊脂糖基質，未螯合金屬離子（由客戶DIY金屬離子）
	11-0012-02	50ml
	11-0012-03	250ml
	11-0012-04	500ml
	11-0012-05	1000ml
His標簽蛋白純化柱（IMAC）	11-0022-01	1ml
His標簽蛋白純化柱（IMAC）	11-0022-02	5ml
His標簽蛋白純化介質（HF-IDA）	11-1010-01	5ml	聚丙烯酸酯基質，耐壓，高流速（默認Ni²⁺，若需螯合其他離子，請告知銷售人員）
	11-1010-02	50ml
	11-1010-03	250ml
	11-1010-04	500ml
	11-1010-05	1000ml
His標簽蛋白純化柱（HF-IDA）	11-1020-01	1ml
His標簽蛋白純化柱（HF-IDA）	11-1020-02	5ml
His標簽蛋白純化介質（HF-NTA）	11-1011-01	5ml	聚丙烯酸酯基質，耐壓，高流速（默認Ni²⁺，若需螯合其他離子，請告知銷售人員）
	11-1011-02	50ml
	11-1011-03	250ml
	11-1011-04	500ml
	11-1011-05	1000ml
His標簽蛋白純化柱（HF-NTA）	11-1021-01	1ml
His標簽蛋白純化柱（HF-NTA）	11-1021-02	5ml
GST標簽蛋白純化介質	12-0010-01	5ml	瓊脂糖基質，特異性強
	12-0010-02	50ml
	12-0010-03	250ml
	12-0010-04	500ml
	12-0010-05	1000ml
GST標簽蛋白純化柱	12-0020-01	1ml
GST標簽蛋白純化柱	12-0020-02	5ml
肝素親和介質	15-0010-01	5ml	瓊脂糖基質，適應范圍廣
	15-0010-02	50ml
	15-0010-03	250ml
	15-0010-04	500ml
	15-0010-05	1000ml
肝素預裝柱	15-0020-01	1ml
肝素預裝柱	15-0020-02	5ml
抗體純化介質（Pro G）	16-0010-01	5ml	瓊脂糖基質，可吸附ProA介質無法吸附的某些IgG
	16-0010-02	50ml
	16-0010-03	250ml
	16-0010-04	500ml
	16-0010-05	1000ml
抗體純化柱（Pro G）	16-0020-01	1ml
抗體純化柱（Pro G）	16-0020-02	5ml
抗體純化介質（Pro A）	18-0010-01	5ml	瓊脂糖基質，耐堿洗
	18-0010-02	50ml
	18-0010-03	250ml
	18-0010-04	500ml
	18-0010-05	1000ml
抗體純化柱（ProA）	18-0020-01	1ml
抗體純化柱（ProA）	18-0020-02	5ml

活化偶聯(lián)介質

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	備注
環(huán)氧活化偶聯(lián)介質	21-0010-01	50ml	偶聯(lián)化學鍵牢固，不易脫落推薦pH值10-14
	21-0010-02	250ml
	21-0010-03	500ml
	21-0010-04	1000ml
NHS活化偶聯(lián)介質	22-0010-01	50ml	反應活性強，適宜弱酸性或中性條件偶聯(lián) 推薦pH值6-8
	22-0010-02	250ml
	22-0010-03	500ml
	22-0010-04	1000ml

離子交換介質及預裝柱

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	備注
DEAE弱陰離子交換介質	31-0010-01	50ml	瓊脂糖基質
	31-0010-02	500ml
	31-0010-03	1000ml
DEAE弱陰離子交換柱	31-0020-01	5ml
Q強陰離子交換介質	32-0010-01	50ml	瓊脂糖基質
	32-0010-02	500ml
	32-0010-03	1000ml
Q強陰離子交換柱	32-0020-01	5ml
CM弱陽離子交換介質	33-0010-01	50ml	瓊脂糖基質
	33-0010-02	500ml
	33-0010-03	1000ml
CM弱陽離子交換柱	33-0020-01	5ml
S強陽離子交換介質	34-0010-01	50ml	瓊脂糖基質
	34-0010-02	500ml
	34-0010-03	1000ml
S強陽離子交換柱	34-0020-01	5ml
HP-DEAE60弱陰離子交換介質	31-1010-01	50ml	聚丙烯酸酯基質，高流速
HP-DEAE30弱陰離子交換介質	31-1011-01	50ml	聚丙烯酸酯基質，高分辨率
HP-Q60強陰離子交換介質	32-1010-01	50ml	聚丙烯酸酯基質，高流速
HP-Q30強陰離子交換介質	32-1011-01	50ml	聚丙烯酸酯基質，高分辨率
HP-CM60弱陽離子交換介質	33-1010-01	50ml	聚丙烯酸酯基質，高流速
HP-CM30弱陽離子交換介質	33-1011-01	50ml	聚丙烯酸酯基質，高分辨率
HP-S60強陽離子交換介質	34-1010-01	50ml	聚丙烯酸酯基質，高流速
HP-S30強陽離子交換介質	34-1011-01	50ml	聚丙烯酸酯基質，高分辨率

疏水層析介質及預裝柱

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	備注
苯基疏水介質（低密度）	41-0010-01	50ml	瓊脂糖基質，適于中度疏水蛋白
	41-0010-02	500ml
	41-0010-03	1000ml
苯基疏水柱（低密度）	41-0020-01	5ml
苯基疏水介質（高密度）	41-0011-01	50ml	瓊脂糖基質，適于低度疏水蛋白
	41-0011-02	500ml
	41-0011-03	1000ml
苯基疏水柱（高密度）	41-0021-01	5ml
辛基疏水介質	42-0010-01	50ml	瓊脂糖基質，適于中度疏水蛋白
	42-0010-02	500ml
	42-0010-03	1000ml
辛基疏水柱	42-0020-01	5ml
丁基疏水介質	43-0010-01	50ml	瓊脂糖基質，適于高度疏水蛋白
	43-0010-02	500ml
	43-0010-03	1000ml
丁基疏水柱	43-0020-01	5ml

凝膠過濾介質及預裝柱

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	備注
G25凝膠過濾介質	51-0010-01	100ml	分離范圍：1KD-10KD
	51-0010-02	500ml
	51-0010-03	1000ml
G25脫鹽柱	51-0020-01	5ml
G50凝膠過濾介質	52-0010-01	100ml	分離范圍：4KD-30KD
	52-0010-02	500ml
	52-0010-03	1000ml
G50凝膠柱	52-0020-01	5ml

Heparin Affinity Resin肝素親和樹脂

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