Heparin Affinity Resin肝素親和樹脂

時(shí)間：2019/7/4閱讀：872

肝素親和介質(zhì)適用于與肝素分子有特異性吸附作用的蛋白分子的分離和純化，例如：凝血因子、抗凝血酶III、生長因子、干擾素以及脂肪酶等。肝素親和介質(zhì)以瓊脂糖軟膠微球作為基質(zhì),采用惠誠生物*的化學(xué)鍵和技術(shù)固定肝素分子,通過肝素與抗凝血酶III或具有類似結(jié)構(gòu)蛋白分子之間的特異性結(jié)合力實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的分離，上?；菡\生物提供肝素親和介質(zhì)，詳情咨詢上?；菡\生物.

肝素親和介質(zhì)具有以下特點(diǎn)：

1.親和力好

2.蛋白活性回收率高

3.化學(xué)穩(wěn)定性好

上海惠誠生物肝素親和介質(zhì)產(chǎn)品說明書如下：

一、產(chǎn)品簡介

肝素（Heparin）是一種含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子III、凝血酶、類凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII，也能和大腸桿菌表達(dá)的人白介素、人前列腺生長因子、重組人血管內(nèi)皮生長因子、軟骨生長因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子、重組人酸性成纖維細(xì)胞生長因子、重組肝細(xì)胞生長因子、重組鼠肝素輔因子II、重組人血小板第四因子、重組人內(nèi)皮抑素、重組人角質(zhì)細(xì)胞生長因子等生物大分子結(jié)合，所以肝素親和介質(zhì)可以用于這類物質(zhì)的純化。肝素親和層析介質(zhì)以交聯(lián)瓊脂糖為基質(zhì)，采用環(huán)氧活化工藝，將肝素偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上，該填料具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性，配基不易脫落，使用壽命長，使用方便，應(yīng)用廣泛。

二、產(chǎn)品特性

參數(shù)	指標(biāo)
基質(zhì)	瓊脂糖凝膠微球
配基	Heparin
形狀	球形
介質(zhì)平均粒徑	90 μm (50~160)
配基密度	3.5mg heparin/ml wet gel
動(dòng)態(tài)載量	2mg AT III/ml wet gel
高流速（25℃）	500 cm/h
高耐壓	0.3 MPa (3 bar)
pH穩(wěn)定性	4~12（長時(shí)間）；4~13（短時(shí)間）
保存	4~8 oC（0.05M乙酸鈉+20%乙醇）

三、操作步驟

肝素親和層析介質(zhì)廣泛用于抗凝血因子III、凝血酶、類凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII等生物大分子的分離純化。層析操作通常包括裝柱、平衡、進(jìn)料、淋洗、洗脫、再生等步驟。

1.平衡：用5~10CV的平衡緩沖液（20-50mM PB或Tris/HCl，pH 7.4-8.0，可加入0.15M NaCl抑制非特異吸附）平衡層析柱，至流出液電導(dǎo)和pH不變（與平衡液一致）。

2.進(jìn)料：樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應(yīng)經(jīng)離心或微濾處理。進(jìn)料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標(biāo)蛋白的含量計(jì)算。

3.淋洗：上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線。

4.洗脫：用洗脫緩沖液（20-50mM PB或Tris/HCl+1-2M NaCl，pH7.4-8.0，NaCl濃度需要根據(jù)目標(biāo)蛋白的結(jié)合力進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整）洗脫，收集流出液?？刹捎镁€性梯度或階越式梯度洗脫。

5.原位清洗：為了避免不同樣品間的相互干擾，或者當(dāng)介質(zhì)污染比較嚴(yán)重時(shí)（反壓增加），需要對(duì)介質(zhì)進(jìn)行在位清洗。

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合的蛋白，可用2~3 CV以上的2M NaCl清洗，并用3 CV以上的純水沖洗。（2）對(duì)沉淀或變性蛋白蛋白，可用0.1M NaOH清洗（1~2h），并用3~10 CV平衡液和3 CV以上的純水沖洗。也可用6M Gua-HCl或8M Urea清洗（0.5~1h）（3）對(duì)疏水性結(jié)合的蛋白，可用0.1~0.5%的非離子去污劑清洗（1~2h），并用3~10 CV的純水沖洗。

其它注意事項(xiàng)：在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。

四、具體應(yīng)用實(shí)例

轉(zhuǎn)基因羊奶中抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）的分離純化

層析柱：2.5 cm × 1.0 cm I.D.，CV=2 mL

樣品：預(yù)處理的轉(zhuǎn)基因羊奶（0.45 µm濾膜過濾，上樣10 mL）

平衡緩沖液（A）：50 mM Tris/Hcl, pH 7.2

洗脫緩沖液（B）：50 mM Tris/Hcl+1 M NaCl, pH 7.2

流速：1 mL/min

肝素親和介質(zhì)——層析介質(zhì)西寶生物 400 021 8158

圖1 Heparin QZT 6FF親和層析譜圖圖2 肝素親和層析所得樣品SDS-PAGE圖

（1. 惠誠介質(zhì)的洗脫峰P1；2.惠誠介質(zhì)的洗脫峰P2；3. 進(jìn)口介質(zhì)的洗脫峰P1；4. 進(jìn)口介質(zhì)的洗脫峰P2）

五、特色服務(wù)

（1）提供介質(zhì)篩選及工藝開發(fā)的咨詢。

（2）接受客戶委托開發(fā)各種分離介質(zhì)和分離工藝。

（3）按客戶要求提供各種規(guī)格的預(yù)裝柱。

（4）為客戶提供專業(yè)的售前和售后服務(wù)。

六、層析介質(zhì)及預(yù)裝柱產(chǎn)品訂購指南

親和層析介質(zhì)及預(yù)裝柱

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	備注
His標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)（IDA）	11-0010-01	5ml	瓊脂糖基質(zhì)，高載量（默認(rèn)Ni²⁺，若需螯合其他離子，請(qǐng)告知銷售人員）
	11-0010-02	50ml
	11-0010-03	250ml
	11-0010-04	500ml
	11-0010-05	1000ml
His標(biāo)簽蛋白純化柱（IDA）	11-0020-01	1ml
His標(biāo)簽蛋白純化柱（IDA）	11-0020-02	5ml
His標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)（NTA）	11-0011-01	5ml	瓊脂糖基質(zhì)，低脫落，可耐受DTT，β-Me等還原劑（默認(rèn)Ni²⁺，若需螯合其他離子，請(qǐng)告知銷售人員）
	11-0011-02	50ml
	11-0011-03	250ml
	11-0011-04	500ml
	11-0011-05	1000ml
His標(biāo)簽蛋白純化柱（NTA）	11-0021-01	1ml
His標(biāo)簽蛋白純化柱（NTA）	11-0021-02	5ml
His標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)（IMAC）	11-0012-01	5ml	瓊脂糖基質(zhì)，未螯合金屬離子（由客戶DIY金屬離子）
	11-0012-02	50ml
	11-0012-03	250ml
	11-0012-04	500ml
	11-0012-05	1000ml
His標(biāo)簽蛋白純化柱（IMAC）	11-0022-01	1ml
His標(biāo)簽蛋白純化柱（IMAC）	11-0022-02	5ml
His標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)（HF-IDA）	11-1010-01	5ml	聚丙烯酸酯基質(zhì)，耐壓，高流速（默認(rèn)Ni²⁺，若需螯合其他離子，請(qǐng)告知銷售人員）
	11-1010-02	50ml
	11-1010-03	250ml
	11-1010-04	500ml
	11-1010-05	1000ml
His標(biāo)簽蛋白純化柱（HF-IDA）	11-1020-01	1ml
His標(biāo)簽蛋白純化柱（HF-IDA）	11-1020-02	5ml
His標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)（HF-NTA）	11-1011-01	5ml	聚丙烯酸酯基質(zhì)，耐壓，高流速（默認(rèn)Ni²⁺，若需螯合其他離子，請(qǐng)告知銷售人員）
	11-1011-02	50ml
	11-1011-03	250ml
	11-1011-04	500ml
	11-1011-05	1000ml
His標(biāo)簽蛋白純化柱（HF-NTA）	11-1021-01	1ml
His標(biāo)簽蛋白純化柱（HF-NTA）	11-1021-02	5ml
GST標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)	12-0010-01	5ml	瓊脂糖基質(zhì)，特異性強(qiáng)
	12-0010-02	50ml
	12-0010-03	250ml
	12-0010-04	500ml
	12-0010-05	1000ml
GST標(biāo)簽蛋白純化柱	12-0020-01	1ml
GST標(biāo)簽蛋白純化柱	12-0020-02	5ml
肝素親和介質(zhì)	15-0010-01	5ml	瓊脂糖基質(zhì)，適應(yīng)范圍廣
	15-0010-02	50ml
	15-0010-03	250ml
	15-0010-04	500ml
	15-0010-05	1000ml
肝素預(yù)裝柱	15-0020-01	1ml
肝素預(yù)裝柱	15-0020-02	5ml
抗體純化介質(zhì)（Pro G）	16-0010-01	5ml	瓊脂糖基質(zhì)，可吸附ProA介質(zhì)無法吸附的某些IgG
	16-0010-02	50ml
	16-0010-03	250ml
	16-0010-04	500ml
	16-0010-05	1000ml
抗體純化柱（Pro G）	16-0020-01	1ml
抗體純化柱（Pro G）	16-0020-02	5ml
抗體純化介質(zhì)（Pro A）	18-0010-01	5ml	瓊脂糖基質(zhì)，耐堿洗
	18-0010-02	50ml
	18-0010-03	250ml
	18-0010-04	500ml
	18-0010-05	1000ml
抗體純化柱（ProA）	18-0020-01	1ml
抗體純化柱（ProA）	18-0020-02	5ml

活化偶聯(lián)介質(zhì)

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	備注
環(huán)氧活化偶聯(lián)介質(zhì)	21-0010-01	50ml	偶聯(lián)化學(xué)鍵牢固，不易脫落推薦pH值10-14
	21-0010-02	250ml
	21-0010-03	500ml
	21-0010-04	1000ml
NHS活化偶聯(lián)介質(zhì)	22-0010-01	50ml	反應(yīng)活性強(qiáng)，適宜弱酸性或中性條件偶聯(lián) 推薦pH值6-8
	22-0010-02	250ml
	22-0010-03	500ml
	22-0010-04	1000ml

離子交換介質(zhì)及預(yù)裝柱

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	備注
DEAE弱陰離子交換介質(zhì)	31-0010-01	50ml	瓊脂糖基質(zhì)
	31-0010-02	500ml
	31-0010-03	1000ml
DEAE弱陰離子交換柱	31-0020-01	5ml
Q強(qiáng)陰離子交換介質(zhì)	32-0010-01	50ml	瓊脂糖基質(zhì)
	32-0010-02	500ml
	32-0010-03	1000ml
Q強(qiáng)陰離子交換柱	32-0020-01	5ml
CM弱陽離子交換介質(zhì)	33-0010-01	50ml	瓊脂糖基質(zhì)
	33-0010-02	500ml
	33-0010-03	1000ml
CM弱陽離子交換柱	33-0020-01	5ml
S強(qiáng)陽離子交換介質(zhì)	34-0010-01	50ml	瓊脂糖基質(zhì)
	34-0010-02	500ml
	34-0010-03	1000ml
S強(qiáng)陽離子交換柱	34-0020-01	5ml
HP-DEAE60弱陰離子交換介質(zhì)	31-1010-01	50ml	聚丙烯酸酯基質(zhì)，高流速
HP-DEAE30弱陰離子交換介質(zhì)	31-1011-01	50ml	聚丙烯酸酯基質(zhì)，高分辨率
HP-Q60強(qiáng)陰離子交換介質(zhì)	32-1010-01	50ml	聚丙烯酸酯基質(zhì)，高流速
HP-Q30強(qiáng)陰離子交換介質(zhì)	32-1011-01	50ml	聚丙烯酸酯基質(zhì)，高分辨率
HP-CM60弱陽離子交換介質(zhì)	33-1010-01	50ml	聚丙烯酸酯基質(zhì)，高流速
HP-CM30弱陽離子交換介質(zhì)	33-1011-01	50ml	聚丙烯酸酯基質(zhì)，高分辨率
HP-S60強(qiáng)陽離子交換介質(zhì)	34-1010-01	50ml	聚丙烯酸酯基質(zhì)，高流速
HP-S30強(qiáng)陽離子交換介質(zhì)	34-1011-01	50ml	聚丙烯酸酯基質(zhì)，高分辨率

疏水層析介質(zhì)及預(yù)裝柱

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	備注
苯基疏水介質(zhì)（低密度）	41-0010-01	50ml	瓊脂糖基質(zhì)，適于中度疏水蛋白
	41-0010-02	500ml
	41-0010-03	1000ml
苯基疏水柱（低密度）	41-0020-01	5ml
苯基疏水介質(zhì)（高密度）	41-0011-01	50ml	瓊脂糖基質(zhì)，適于低度疏水蛋白
	41-0011-02	500ml
	41-0011-03	1000ml
苯基疏水柱（高密度）	41-0021-01	5ml
辛基疏水介質(zhì)	42-0010-01	50ml	瓊脂糖基質(zhì)，適于中度疏水蛋白
	42-0010-02	500ml
	42-0010-03	1000ml
辛基疏水柱	42-0020-01	5ml
丁基疏水介質(zhì)	43-0010-01	50ml	瓊脂糖基質(zhì)，適于高度疏水蛋白
	43-0010-02	500ml
	43-0010-03	1000ml
丁基疏水柱	43-0020-01	5ml

凝膠過濾介質(zhì)及預(yù)裝柱

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	備注
G25凝膠過濾介質(zhì)	51-0010-01	100ml	分離范圍：1KD-10KD
	51-0010-02	500ml
	51-0010-03	1000ml
G25脫鹽柱	51-0020-01	5ml
G50凝膠過濾介質(zhì)	52-0010-01	100ml	分離范圍：4KD-30KD
	52-0010-02	500ml
	52-0010-03	1000ml
G50凝膠柱	52-0020-01	5ml

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