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上?;菡\生物供應實驗室電泳儀電源
電泳儀是實現電泳分析的儀器。一般由電源、電泳槽、檢測單元等組成。所謂電泳,是指帶電粒子在電場中的運動,不同物質由于所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運動速度不同,據此可以對不同物質進行定性或定量分析,或將一定混合物進行組分分析或單個組分提取制備。
常用電泳設備的基本結構包括:電源、電泳槽及附加裝置,結構配置分為垂直和水平兩類電泳儀。
電泳儀的工作原理:
在溶液中能吸附帶電質點或本身帶有可解離基團的物質顆粒,如蛋白質、氨基酸等,在一定的pH值條件下,于直流電場中必然會受到電性相反的電極吸引而發(fā)生移動。不同物質的顆粒在電場中的移動速度除與其帶電狀態(tài)和電場強度有關外,還與顆粒的大小、形狀和介質黏度有關。根據這一特征,應用電泳法便可以對不同物質進行定性或定量分析,或將一定混合物進行組分分析或單個組分提取制備,電泳儀正是基于上述原理設計制造的。
電泳的影響因素很多,主要有被分離物質的帶電荷量多少、電場強度、緩沖液的pH值和離子強度及支持介質的化學惰性。
電泳儀的分類:
根據電泳中是否使用支持介質分為自由電泳和區(qū)帶電泳。
自由電泳不使用支持介質,電泳在溶液中進行。這類電泳又分為非自由界面電泳和自由界面電泳兩類。非自由界面電泳指懸浮在溶液中的帶電粒子(如各種細胞)通電后全部移動,不出現界面,如顯微電泳等。自由界面電泳中被分離物質集中在某一層,形成各自的界面而進行定性或定量分析。自由界面電泳需要昂貴精密的電流儀器,僅在少數特殊電泳如等電聚焦電泳和等速電泳中使用。
區(qū)帶電泳都使用支持介質,根據支持介質不同分為濾紙電泳、醋纖膜電泳、薄層電泳和凝膠電泳等。此外,根據支持介質的裝置形式不同又可分為水平板式電泳、垂直板式電泳、垂直盤狀電泳、毛細管電脈、橋形電泳和連續(xù)流動電泳等。
常見的幾種電泳儀有:
1. 全自動熒光/可見光雙系統(tǒng)電泳儀
具有熒光/可見光雙系統(tǒng),使用熒光試劑項目如CK、LD同工酶。優(yōu)點靈敏度、準確度高且采用高壓、低溫系統(tǒng),速度非常快。
2. 全自動醋纖膜電泳儀
為可見光單系統(tǒng),使用醋纖膜電泳片,優(yōu)點為自動化程度更高。多用于臨床常規(guī)血清蛋白電泳分析。
3. 全自動瓊脂糖電泳儀
為可見光單系統(tǒng),使用瓊脂糖凝膠電泳膠片,優(yōu)點為靈敏度高,可用于低濃度蛋白檢驗,如尿蛋白及腦脊液蛋白,同工酶的分離效果也相當不錯,所能做項目較多且靈敏度較高。
4. 全自動電泳分析系統(tǒng)
該電泳儀集中了上述儀器的優(yōu)點,自動點樣、電泳、呈色(或染色、脫色)、烘干。可用各種電泳片,包括瓊脂片、醋酸片、聚丙烯酰胺等,采用可見光及熒光呈色雙系統(tǒng),是一種較理想的電泳儀。
電泳儀的使用方法:
1. 首先用導線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯接,注意極性不要接反。
2. 電泳儀電源開關調至關的位置,電壓旋鈕轉到小,根據工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。
3. 接通電源,緩緩旋轉電壓調節(jié)鈕直到達到的所需電壓為止,設定電泳終止時間,此時電泳即開始進行。
4. 工作完畢后,應將各旋鈕、開關旋至零位或關閉狀態(tài),并撥出電泳插頭。
電泳儀的使用注意事項:
1. 電泳儀通電進入工作狀態(tài)后,禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳槽內取放東西,如需要應先斷電,以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端,以防漏電。
2. 儀器通電后,不要臨時增加或撥除輸出導線插頭,以防短路現象發(fā)生,雖然儀器內部附設有保險絲,但短路現象仍有可能導致儀器損壞。
3. 由于不同介質支持物的電阻值不同,電泳時所通過的電流量也不同,其泳動速度及泳至終點所需時間也不同,故不同介質支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。
4. 在總電流不超過儀器額定電流時(大電流范圍),可以多槽關聯使用,但要注意不能超載,否則容易影響儀器壽命。
5. 某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時,允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開機,但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負載再開機,否則電壓表指針將大幅度跳動,容易造成不必要的人為機器損壞。
6. 使用過程中發(fā)現異?,F象,如較大噪音、放電或異常氣味,須立即切斷電源,進行檢修,以免發(fā)生意外事故。
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