Blue-Gal檢測(cè)β-半乳糖苷酶技術(shù)原理和主要應(yīng)用

β-半乳糖苷酶 β-galactosidase存在于多種細(xì)菌、真核生物細(xì)胞和一些病原體中，參與乳糖代謝與細(xì)胞衰老過(guò)程。β-半乳糖苷酶在哺乳動(dòng)物體內(nèi)其主要存在于腸道菌群中，但在老化細(xì)胞也有一定活性。β-半乳糖苷酶廣泛存在于生物體，在演化與生存過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

Blue-Gal是一種β-半乳糖苷酶重要的顯色底物，可產(chǎn)生比 X-gal更深的藍(lán)色。β-半乳糖苷酶水解 blue-gal 產(chǎn)生不溶于乙醇和二甲苯的藍(lán)色沉淀物，適于免疫印跡和免疫細(xì)胞化學(xué)分析。Blue-Gal是一種廣泛應(yīng)用于組織化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)與酶學(xué)研究的重要化學(xué)試劑。它通過(guò)檢測(cè)β-半乳糖苷酶的活性與表達(dá)，為腫瘤研究、干細(xì)胞分化、基因表達(dá)調(diào)控與細(xì)胞活性評(píng)價(jià)提供有效工具。

規(guī)格參數(shù)：

HGS-01045 5-溴-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 Blue-Gal Bluo-Gal 97753-82-7

Blue-Gal檢測(cè)β-半乳糖苷酶技術(shù)原理：

Blue-Gal在β-半乳糖苷酶的作用下可被水解生成半乳糖和5-溴-4-氯-3-吡啶-2-醛，后者與氫氧化鐵反應(yīng)生成藍(lán)色產(chǎn)物。

Blue-Gal檢測(cè)β-半乳糖苷酶活性步驟:

1. 向樣品中加入Blue-Gal底物，如果樣品中存在β-半乳糖苷酶，Blue-Gal將被水解；否則Blue-Gal保持不變。

2. 反應(yīng)一定時(shí)間后，加入氫氧化鐵(Fehling試劑)，如果Blue-Gal被水解，會(huì)與氫氧化鐵反應(yīng)生成藍(lán)色產(chǎn)物；否則無(wú)色。

3. 通過(guò)顯微鏡下的藍(lán)色沉淀或藍(lán)色溶液判斷β-半乳糖苷酶的存在與否?；蛘邷y(cè)量藍(lán)色產(chǎn)物的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算酶活性或濃度。

4. 根據(jù)反應(yīng)條件如時(shí)間、溫度、pH等控制變量，可以檢測(cè)β-半乳糖苷酶活性的變化或酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，以評(píng)價(jià)不同因素對(duì)其活性的影響。

5. 也可以在固定反應(yīng)條件下，比較不同樣品中藍(lán)色產(chǎn)物的生成，以判斷β-半乳糖苷酶活性或表達(dá)的高低。這用于轉(zhuǎn)基因檢測(cè)、細(xì)胞活性比較等。

Blue-Gal檢測(cè)β-半乳糖苷酶主要應(yīng)用:

1. 組織化學(xué)染色

Blue-Gal用于檢測(cè)組織內(nèi)β-半乳糖苷酶活性或β-gal過(guò)表達(dá)，實(shí)現(xiàn)組織化學(xué)染色。常用于檢測(cè)腫瘤組織在癌變過(guò)程中l(wèi)acZ基因表達(dá)變化。

2. 干細(xì)胞和分子生物學(xué)研究

Blue-Gal用于檢測(cè)干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞的分化過(guò)程中l(wèi)acZ基因的表達(dá)，以監(jiān)測(cè)干細(xì)胞向目標(biāo)細(xì)胞的定向分化。也用于研究lacZ基因在胚胎發(fā)育與分子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中的表達(dá)調(diào)控。

3. 轉(zhuǎn)基因檢測(cè)

Blue-Gal用于檢測(cè)不同組織及細(xì)胞中轉(zhuǎn)入的lacZ報(bào)告基因表達(dá),實(shí)現(xiàn)對(duì)組織特異性啟動(dòng)子活性與組織向性的檢測(cè)評(píng)價(jià)。

4. 細(xì)胞活性與毒性檢測(cè)

Blue-Gal用于檢測(cè)不同條件下細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性的變化，間接反映細(xì)胞代謝活性的增強(qiáng)或抑制，用于細(xì)胞活性與毒性檢測(cè)。如某些試劑對(duì)β-半乳糖苷酶活性的影響可判斷其對(duì)細(xì)胞活性的作用。

5. 酶學(xué)研究

Blue-Gal作為β-半乳糖苷酶的重要底物，用于研究β-半乳糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)、基因調(diào)控作用機(jī)制以及激活與抑制因素，為酶學(xué)基礎(chǔ)研究提供工具。