CHO瞬轉表達基礎培養(yǎng)基適合于不同亞型中國倉鼠卵巢細胞的高密度懸浮培養(yǎng)

時間：2025/2/7閱讀：60

上海惠誠生物提供的CHO 瞬轉表達基礎培養(yǎng)基（Basal Medium）與補料培養(yǎng)基（Feed Medium）是完(空)全化學成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何動物來源的成分，適合于不同亞型中國倉鼠卵巢細胞（CHO-K1 和 CHO-S 細胞）的高密度懸浮培養(yǎng)，可實現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達：培養(yǎng) 7 天表達量在 500mg/L 左右，14 天表達量 1000mg/L 左右，部分可達 2g/L 以上。

上海惠誠生物提供 CHO 細胞瞬轉表達培養(yǎng)基已完成美國 DMF 登記（DMF039790），更有力的支持客戶需求。

產(chǎn)品描述

名稱	備注	谷氨酰胺	葡萄糖	生長因子	適用細胞
TransCHO	初始培養(yǎng)基	含	6 g/L	不含	CHO K1, CHOS 等
CHO FM02AB	補料培養(yǎng)基	不含	80 g/L	不含
CHO enhancer	表達增強劑	不含
Trans PEI	轉染試劑	0.5mg/mL

Trans PEI轉染試劑是一種分子量為40 kd的陽離子聚合物，它能與核酸形成復合物，并使該復合物進入哺乳動物細胞?？蓮V泛適用于常見細胞系，如CHO-K1、CHO-S、 HEK293、HEK293T、 Hep G2、Hela、COS-1、COS-7、NIH/3T3和SF9等。該試劑即使在有血清存在的情況下，它仍然能高效的將核酸導入細胞。Trans PEI培養(yǎng)基可用于蛋白/抗體瞬時表達、腺相關病毒、慢病毒、疫苗、診斷試劑等領域，采用高密度強化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，可獲得更高的表達量或滴度。

Trans PEI轉染試劑具有如下優(yōu)點：

1.優(yōu)(空)越的轉染效率

2.重組蛋白的高表達水平

3.更強的穩(wěn)定性（-20℃保存2年，2-8℃保存6個月）

4.低細胞毒性，易于操作

5.可提供GMP級別

6.10mL/支 0.5 mg/mL

推薦使用說明

步驟	使用方法
細胞傳代	0.3 e6 cells/mL 接種，3 天傳代一次，當細胞倍增時間不低于對照培養(yǎng)基時認為細胞完(空)全適應新培養(yǎng)基，進入下一步驟；
轉染前一天	密度調整到 2e6 cells/mL
轉染當天	以 20mL 培養(yǎng)體積為例（其他培養(yǎng)體積，相關試劑需要按體積折算） 1：用新鮮培養(yǎng)基稀釋細胞密度至 6e6 cells/mL; 2: 用 1mL TransCHO 培養(yǎng)基稀釋 320uLTrans PEI（即終使用量 8.0 ug/mL），并混合均勻； 3：將 32ug 質粒（即 1.6ug/mL）與加入步驟 2 中混合均勻，并孵育 15~20min ; 4: 緩慢滴加上述混合物至培養(yǎng)基中，邊滴加邊混合，使混合物能均勻擴展； 5: 搖瓶放入搖床中，培養(yǎng)時間記為 Day0, 轉染結束
補料培養(yǎng)	1：轉染后~24h 左右補加 0.3%的 CHO enhancer 和 8%的 CHO FM02AB，并降溫至32℃培養(yǎng)； 2：之后每 4 天補加一次 8%的 CHO FM02AB，葡萄糖按需添加（通常 Day6 和 Day9 分別添加 4g/L即可）； 3：活力≤60%即可培養(yǎng)結束；
溫度及其他參數(shù)	1：初始 37℃，轉染 8-24h 時降溫至 32℃； 2：搖床轉速 120rpm, 50mm 振幅，5-8% CO2；

產(chǎn)品運輸及存儲

運輸：常溫或冷鏈運輸；

存儲：2~8℃，干燥、避光保存；

有效期：基礎培養(yǎng)基干粉：2 年；

基礎培養(yǎng)基液體：1 年；

補料培養(yǎng)基干粉：2 年；

補料培養(yǎng)基液體：1 年（開封后建議在 3 個月內(nèi)使用完）。

應用范圍

上?；菡\生物提供的培養(yǎng)基可用于 CHO 細胞凍存、復蘇、傳代、高密度強化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，可實現(xiàn)

細胞快速生長，維持細胞高活率及蛋白該表達。

使用指南

細胞凍存

1．準備處于對數(shù)生長期狀態(tài)較好的細胞，且細胞活率在 90%以上；

2．檢測活細胞密度，計算所需的凍存培養(yǎng)基體積，計算最終細胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；

3．準備好所需的凍存培養(yǎng)基：90%基礎培養(yǎng)基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；

4．設置離心力 200×g，離心 5 min，用凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞至凍存體積；

5．將懸浮細胞等分保存至適宜規(guī)格的細胞凍存管中；

6．將細胞凍存管置于程序降溫盒中，按照降溫標準進行降溫；

7．將細胞轉移到液氮罐中保存。

細胞復蘇

1．提前打開水浴鍋，并設置溫度至 36.5℃~37.0℃；

2．將細胞從液氮罐中移出后，快速在水浴鍋中融化冷凍的細胞（＜3 min）；

3．將冷凍管中的細胞液全部轉移到 125 mL 含有 30 mL 預溫過的基礎培養(yǎng)基的搖瓶中；

4．置于 36.5~37.0℃，5~8% CO 2 ，轉速 120 rpm（軌道振幅 50 mm）的搖床中培養(yǎng)；

5．細胞至少傳代 2 次，待細胞完(空)全復蘇且活率在 90%以上，可按計劃進行后續(xù)操作。

細胞傳代

1．將基礎培養(yǎng)基放入 36.5~37.0℃條件下預熱 20 min；

2．檢測活細胞密度，按接種密度為 0.3×10 6 cells/mL 的最終傳代體積，計算所需種子液量；

3．無菌轉移所需量的種子液，添加至含所需體積的已預熱的基礎培養(yǎng)基的搖瓶中；

4．將搖瓶放入溫度 36.5~37.0℃，120 rpm（振幅 50 mm）（搖瓶底面積增大，需減小搖床轉速），

5%~8% CO 2 的細胞培養(yǎng)搖床中進行培養(yǎng)；

5．每 3 天用新鮮的培養(yǎng)基按上述步驟進行傳代培養(yǎng)。

CHO瞬轉表達基礎培養(yǎng)基適合于不同亞型中國倉鼠卵巢細胞的高密度懸浮培養(yǎng)

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