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技術(shù)文章

基于NanoBRET™TE的細(xì)胞內(nèi)激酶細(xì)胞測(cè)定服務(wù)

閱讀:974          發(fā)布時(shí)間:2021-5-31

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用于晶體學(xué)的超純蛋白質(zhì)的定制生產(chǎn)

我們與加拿大公司IniXium Inc.的合作使我們能夠?yàn)榭蛻籼峁?duì)結(jié)構(gòu)測(cè)定和晶體學(xué)應(yīng)用的超純,高質(zhì)量蛋白質(zhì)。我們了解準(zhǔn)確確定小分子與其靶標(biāo)的結(jié)合狀態(tài)以促進(jìn)高效化合物的發(fā)現(xiàn)和優(yōu)化的重要性。晶體結(jié)構(gòu)分析可以是迅速有效地實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)的強(qiáng)大方法!晶體學(xué)研究人員的專業(yè)團(tuán)隊(duì)通過(guò)定制生產(chǎn)最高等級(jí)的蛋白質(zhì),使其成為可能。

服務(wù)特色

我們的服務(wù)首先為您的報(bào)價(jià)提供報(bào)價(jià),包括周轉(zhuǎn)時(shí)間和費(fèi)用。為便于為結(jié)構(gòu)分析和基于片段的藥物發(fā)現(xiàn)提供最佳蛋白質(zhì),我們的服務(wù)包括在開(kāi)始實(shí)際蛋白質(zhì)生產(chǎn)之前進(jìn)行“通過(guò)/不通過(guò)討論。

審查和討論項(xiàng)目進(jìn)度,以便在實(shí)際生產(chǎn)之前決定是否進(jìn)行

使用行之有效的技術(shù)與經(jīng)驗(yàn)豐富的晶體學(xué)專業(yè)人員聯(lián)系

專注于出色的細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)

哺乳動(dòng)物表達(dá)優(yōu)于昆蟲(chóng)表達(dá)的IniXium

時(shí)間/成本效益方法

●跳過(guò)費(fèi)力的病毒儲(chǔ)備制備/放大步驟

●迅速放大以達(dá)到產(chǎn)量的克數(shù)

靶標(biāo)范圍更廣

●某些蛋白質(zhì)僅在哺乳動(dòng)物系統(tǒng)中可行

更接近原生目標(biāo)

哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的糖基化更像天然的

基于NanoBRET™TE的細(xì)胞內(nèi)激酶細(xì)胞測(cè)定服務(wù)

量化激酶抑制劑在自然發(fā)生結(jié)合的細(xì)胞環(huán)境中的占有率,選擇性,親和力,對(duì)于更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)其對(duì)抗人激酶的結(jié)合力至關(guān)重要。除了平衡評(píng)估外,還希望獲得動(dòng)力學(xué)參數(shù)(如“停留時(shí)間”)以更好地優(yōu)化化合物。使用NanoBRET™目標(biāo)參與細(xì)胞內(nèi)激酶測(cè)定系統(tǒng)(Promega)進(jìn)行定量和廣譜激酶分析服務(wù),使您能夠評(píng)估化合物在生理?xiàng)l件下對(duì)選定細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)的參與度,包括化合物在靶標(biāo)上的停留時(shí)間,同時(shí)保持細(xì)胞完整。

提交您感興趣的化合物,Carna將迅速提供蜂窩IC 50 值和停留時(shí)間!

研究表達(dá)全長(zhǎng)激酶的完整細(xì)胞中的化合物功能

一種示蹤劑涵蓋了廣泛的激酶研究

在細(xì)胞ATP環(huán)境下提高了選擇性

[1μM克唑替尼的目標(biāo)占有率]

(右)使用HEK293中的細(xì)胞內(nèi)激酶

(左)使用在Carna MSAKm ATP生化分析的重組激酶

NanoBRET™系統(tǒng)

通過(guò)測(cè)量從生物發(fā)光蛋白供體(NanoLuc®熒光素酶)到熒光探針(NanoBRET™示蹤劑)的能量轉(zhuǎn)移,這種基于接近度的測(cè)定法可檢測(cè)活細(xì)胞中的蛋白質(zhì)相互作用。NanoBRET™TE分析法通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性置換NanoBRET™示蹤劑來(lái)測(cè)量測(cè)試化合物的表觀親和力,該示蹤劑可逆結(jié)合至活細(xì)胞中表達(dá)的NanoLuc®螢光素酶激酶融合蛋白。

將一種可滲透細(xì)胞的熒光NanoBRET™示蹤劑(一種BRET受體)添加到表達(dá)全長(zhǎng)激酶/NanoLuc®融合蛋白的HEK293細(xì)胞中。示蹤劑與靶蛋白的結(jié)合產(chǎn)生BRET信號(hào)

測(cè)試化合物與靶蛋白的結(jié)合導(dǎo)致靶蛋白與完整細(xì)胞內(nèi)部示蹤劑之間的NanoBRET™信號(hào)丟失

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