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FavorPrep™ Tri-RNA 試劑

 

FavorPrep™ Tri-RNAReagent 是一種來自改進(jìn)的苯酚和異硫氰酸胍 (GSN) 方法的試劑，用于單步 RNA 分離。在樣品勻漿或裂解過程中，Tri-RNA 試劑保持 RNA 的完整性，同時(shí)破壞細(xì)胞和溶解細(xì)胞成分。 Tri-RNA 試劑的組成包括苯酚和 GSN 的單相溶液。生物樣品在 Tri-RNA 試劑中勻漿或裂解，勻漿通過添加氯仿、渦旋和離心分離成水相和有機(jī)相。 RNA 僅保留在水相中（透明的上相），DNA 保留在中間相中，蛋白質(zhì)保留在有機(jī)相中（紅色）。通過加入異丙醇從水相中沉淀 RNA 并溶解/濃縮。如果需要，可以分別用乙醇和異丙醇從中間相和有機(jī)相中依次沉淀 DNA 和蛋白質(zhì)，然后溶解/濃縮。

 

特征

 

★ 一步法從組織、細(xì)胞、細(xì)菌、植物、酵母和生物體液中分離總RNA

 

★ 整個(gè)RNA分離過程不到1小時(shí)。

 

★ 純化后的RNA可應(yīng)用于：RT-PCR、Northern雜交、RNase保護(hù)、Poly-A+RNA篩選、差異展示和微陣列分析。應(yīng)用

 

★ 100 次使用 儲(chǔ)存： 4℃ 棕色玻璃瓶中，供日常使用

 

程序：

 

1. 將 1 ml Tri-RNA Reagent 加入 100 mg 組織（或從最多 10 ml 血液或 106 個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞中沉淀的血液 RNA 病毒，或 10 cm2 培養(yǎng)板）

2. 在 Tri-RNA Reagent 中使用玻璃 Teflon 或 Polytron 勻漿器勻漿組織樣品（培養(yǎng)細(xì)胞可以通過重復(fù)移液裂解；濃縮的血液 RNA 病毒可以通過劇烈渦旋裂解）。

3. 將勻漿在室溫下放置 5 分鐘。

4. 加入 0.2 ml 氯仿（未提供）并劇烈混合。

5. 以 12,000 rpm 離心 3 分鐘以分離各相，RNA 在透明的上層水相中。

6. 將 RNA 相轉(zhuǎn)移到干凈的管中。

7. 加入 1x 體積的異丙醇，渦旋以沉淀 RNA，在室溫下放置 10 分鐘，然后以 12,000 rpm 離心 15 分鐘。

8. 去除上清液。

9. 用 0.5 ml 冰冷的 70% 乙醇清洗 RNA 沉淀，12,000 rpm 離心 1 分鐘，小心除去上清液。

10. 短暫旋轉(zhuǎn)以確保 RNA 沉淀沉淀到管的側(cè)壁，然后小心地去除任何殘留的上清液，不要接觸 RNA 沉淀。

11. 將 RNA 重懸在少量 TE，pH8.0 中

 

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