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pNZ2122乳酸乳球菌 矢量，mcs XH，食品級

交貨時(shí)間約 8 – 10天

訂單號：    VS-ELV01300

單位尺寸：  10微克

供應(yīng)商：    MoBiTec GmbH

運(yùn)輸：  逆轉(zhuǎn)錄

存儲：  4°攝氏度

產(chǎn)品子類別：    乳球菌表達(dá)系統(tǒng)

圖片：  pNZ2122.png

 

1引言

乳酸乳球菌和其他乳酸的組成型基因表達(dá)系統(tǒng)由荷蘭NIZO食品研究公司開發(fā)的細(xì)菌易于操作且易于操作對于以下應(yīng)用程序具有優(yōu)勢：

?過量表達(dá)同源和異源基因用于功能研究和

獲得大量的特定基因產(chǎn)物

?代謝工程

?適合蛋白質(zhì)分泌

1.1乳酸乳球菌  MOBITEC專業(yè)代理

乳酸乳球菌是同型發(fā)酵細(xì)菌。它的主要功能是快速乳酸由糖產(chǎn)生酸。廣泛具有的功能特征

乳球菌研究包括碳代謝，細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)蛋白水解系統(tǒng)，抗生素物質(zhì)的產(chǎn)生及其與和抵抗噬菌體。許多乳酸乳球菌菌株的基因組信息是公開的可用。豐富的知識和經(jīng)驗(yàn)導(dǎo)致了乳球菌的使用。

生物技術(shù)的幾個領(lǐng)域，例如細(xì)菌和病毒抗原的表達(dá)通過粘膜免疫接種，人細(xì)胞因子產(chǎn)生及其他安全接種原位治療的治療劑，乳球菌作為細(xì)胞工廠的用途特定化合物的生產(chǎn)以及藥品的中試生產(chǎn)（Mierau，2005年）。

 

1.2乳酸乳球菌質(zhì)粒在其他革蘭氏陽性細(xì)菌中的用途  MOBITEC專業(yè)代理

具有復(fù)制源于乳酸乳球菌的質(zhì)?？捎糜谒腥樗峋驮谄渌锾m氏陽性細(xì)菌中，例如枯草芽孢桿菌（Silke David，1989，AEM55：1483;克里斯·普拉特（Chris Platteeuw），1994，AEM 60：587。伊麗莎白·索維格（Elisabeth Sorvig），2005年，微生物學(xué)，151：2439; Indranil Biswas，2008，微生物學(xué)，154：2275）。

 

 

1.3密碼子用法

直到近，密碼子的使用還是一個重要的問題，在乳酸乳球菌中表達(dá)異源基因（DNA的GC含量為35-37％）。當(dāng)一個基因供體生物與乳酸乳球菌密切相關(guān)，或者DNA GC含量與

與乳酸乳球菌相比，基因成功表達(dá)的可能性很高。如今，廉價(jià)，可靠的量身定制的DNA合成技術(shù)已經(jīng)面世，對特定靶基因起源的限制，如已知氨基酸序列，可以設(shè)計(jì)與宿主密碼子使用模式匹配的基因生物。除了一般的密碼子優(yōu)化外，還可以使用特定的密碼表，例如高度表達(dá)的核糖體蛋白基因的密碼子表，以進(jìn)一步增加產(chǎn)品形成。

2個產(chǎn)品

2.1宿主菌株

乳酸乳球菌亞種。 creemoris MG1363乳品菌株NCDO712的無質(zhì)粒子代。廣泛使用的宿主菌株乳酸乳球菌的克隆和基因表達(dá)（Gasson，1983）。

乳酸乳球菌NZ3000

食品級選擇的標(biāo)準(zhǔn)品系基于乳糖生長的能力。的通常存在于質(zhì)粒中的乳糖操縱子已整合到

染色體和lacF基因被刪除。 lacF基因的缺失使該菌株除非在質(zhì)粒上提供lacF，否則無法在乳糖上生長（van Alen-Boerrigter andde Vos，未發(fā)布的數(shù)據(jù)； de Ruyter et al。，1996）。

乳酸乳球菌NZ1330

該宿主菌株是根據(jù)alr選擇用于食品級表達(dá)系統(tǒng)的標(biāo)記。它是通過刪除alr基因（一種丙氨酸消旋酶編碼基因）而產(chǎn)生的，在祖先菌株MG1363中。 alr基因的缺失導(dǎo)致營養(yǎng)缺陷

必需成分D-丙氨酸，表明該菌株無法在培養(yǎng)基上生長除非在質(zhì)粒上提供了alr，否則無需D-丙氨酸即可將L-丙氨酸轉(zhuǎn)化為D-丙氨酸。 alr基因可作為食品級補(bǔ)充標(biāo)記（Bron等，2002）。

 

 

2.2質(zhì)粒

所有質(zhì)粒均基于pSH71滾環(huán)復(fù)制子（de Vos，1987）。MOBITEC

pNZ124：具有乳酸乳球菌多個克隆位點(diǎn)的通用廣譜宿主克隆載體和其他乳酸菌；氯霉素選擇； （Platteeuw等，1994）MOBITEC

pNZ2103：在宿主的控制下用于組成型基因表達(dá)的廣泛宿主載體lacA啟動子；用于轉(zhuǎn)錄融合；氯霉素選擇； （Platteeuw等，1996）MOBITEC

pNZ2105：具有多個乳桿菌克隆位點(diǎn)的通用食品級克隆載體 MOBITEC

NZ3000；基于LacF的選擇； （Platteeuw等，1996）MOBITEC

pNZ2122：在lacA控制下用于組成型基因表達(dá)的食品級載體乳酸乳球菌NZ3000的啟動子；用于轉(zhuǎn)錄融合；基于LacF的選擇；（Platteeuw等，1996） MOBITEC

pNZ2123：食品級載體；與pNZ2122相同，但具有多個克隆位點(diǎn)  基于LacF的選擇； （Platteeuw等，1996） MOBITEC

pNZ2125：具有適用于基因的多個克隆位點(diǎn)的食品級克隆載體 表達(dá)到乳酸乳球菌菌株NZ1330中；基于alr的選擇； （Platteeuw等，1996） MOBITEC

pNZ7021：在宿主的控制下用于組成型基因表達(dá)的廣泛宿主載體  強(qiáng)啟動子PpepN；氯霉素選擇； （Wegkamp et al。，2007）該載體設(shè)計(jì)用于翻譯融合。它包含pepN核糖體結(jié)合

位點(diǎn)（RBS）和起始密碼子（ATG），然后是SphI位點(diǎn)，這對于沒有自身核糖體結(jié)合位點(diǎn)的靶基因的克隆和起始密碼子。MOBITEC

pNZ7025：在pepN控制下用于組成型基因表達(dá)的食品級載體發(fā)起人基于alr的選擇； （Wegkamp et al。，2007）該載體還被設(shè)計(jì)用于如上所述的質(zhì)粒的翻譯融合。MOBITEC

pNZ7021  注意：重要的是要考慮為轉(zhuǎn)錄融合只能用于使用任何可能的克隆位點(diǎn)克隆具有自身核糖體結(jié)合位點(diǎn)和自身起始密碼子的靶基因。但是，那設(shè)計(jì)用于翻譯融合的表達(dá)載體同時(shí)提供啟動子和翻譯  起始區(qū)域，包括RBS和起始密碼子的序列，后跟一個重要的克隆位點(diǎn)。在這種情況下，必須使用相應(yīng)的限定的限制性位點(diǎn)，導(dǎo)致開放框在框內(nèi)插入閱讀框（ORF）。

所有質(zhì)粒均從水中凍干。使用TE緩沖液或水重新配制質(zhì)粒DNA。MOBITEC

 

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