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產(chǎn)品種類(lèi)齊全，北京華新康信與國(guó)外諸多生命科學(xué)領(lǐng)域*合作眾多，代理品牌Glycan Therapeutics，Intact Genomics，Integral Molecular，Medkoo，Niomech，Terragene，Anshlabs wako，EZbioscience，CMCTAG，Anatrance ，F(xiàn)avorage ，Affinity，Advanced biomatrix，bioplastics，天地人和，TRC，凱杰，義翹，sciencell；價(jià)格優(yōu)勢(shì)品牌：seracare，Streck，Toxin，Zeptometrix，sigma，F(xiàn)orteBio，CanSyn，polyplus，santa，chormsystems，bethyl ，moltox， permagenlabware ，bioflux，Bio－Rad， coriell，   listlabs， ZYMO ， ABclonal  ， EY laboratories  ，greatcellsolar ， agdia ， beckman ， Bioxcell，，biomax ，usascientific ， TRC ，nist ，americanelements，cayman  ， Fisher ，thermofisher ，  nanopore，   日立，  三菱株式會(huì)社 ，RD， takara等，緊跟生命科學(xué)的發(fā)展，不斷滿足客戶的需求，為各位的科研之路上添磚加瓦！

 

 

抗HaloTag®單克隆抗體  Anti-HaloTag® Monoclonal Antibody

G9211_Anti-HaloTag--單克隆抗體_3

針對(duì)HaloTag®蛋白的單克隆抗體

與其他非HaloTag®蛋白幾乎沒(méi)有交叉反應(yīng)

可以通過(guò)Western blot檢測(cè)低0.5–1ng的HaloTag®融合蛋白

以1mg / ml的濃度提供

尺寸：200mg

Anti-HaloTag®單克隆抗體是針對(duì)HaloTag®蛋白的小鼠單克隆抗體，可用于通過(guò)Western blot檢測(cè)HaloTag®融合蛋白。 HaloTag®平臺(tái)滿足了細(xì)胞成像，蛋白質(zhì)純化和蛋白質(zhì)下拉應(yīng)用中功能蛋白質(zhì)分析的靈活性需求。了解有關(guān)HaloTag®技術(shù)的更多信息。

 

應(yīng)用：完整的HaloTag®融合蛋白的免疫學(xué)檢測(cè)，專(zhuān)門(mén)用于蛋白質(zhì)印跡。蛋白質(zhì)印跡的建議工作稀釋度為PBS中的1：1,000。

 

通訊協(xié)定

完整協(xié)議

HaloTag®技術(shù)：專(zhuān)注于成像技術(shù)手冊(cè)

 

1.HaloTag®技術(shù)和細(xì)胞成像簡(jiǎn)介了解蛋白質(zhì)的功能作用以及它們?nèi)绾卧诩?xì)胞內(nèi)相互作用越來(lái)越重要。通常需要多次重組蛋白融合才能完成這項(xiàng)研究，由于在不同應(yīng)用之間移動(dòng)效率低下，有時(shí)可能很慢且麻煩。結(jié)果，需要提供在表達(dá)和定位，蛋白質(zhì)純化，蛋白質(zhì)相互作用發(fā)現(xiàn)，篩選和進(jìn)一步的功能分析之間具有靈活性的重組蛋白質(zhì)標(biāo)簽。 HaloTag®平臺(tái)（a–g）滿足了功能蛋白分析靈活性的需求。這種模塊化技術(shù)基于融合標(biāo)簽和合成配體之間共價(jià)鍵的形成，旨在全面表征細(xì)胞和生化環(huán)境中蛋白質(zhì)的功能。有多種HaloTag®配體（a–g）和試劑盒可用于熒光細(xì)胞成像和蛋白質(zhì)捕獲/純化，以及可定制的反應(yīng)性配體構(gòu)建基塊（a，e，f）。 HaloTag®報(bào)告基因蛋白是水解酶的一種工程化，無(wú)催化活性的衍生物，可與HaloTag®配體形成共價(jià)鍵（圖1）。在生理?xiàng)l件下，該共價(jià)鍵快速形成且高度特異性且基本上不可逆，從而形成即使在嚴(yán)格條件下也穩(wěn)定的復(fù)合物（1-3）。 HaloTag®蛋白是33kDa的單體蛋白，不是哺乳動(dòng)物，植物或大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)源的；因此，沒(méi)有非特異性活性水平，只有高標(biāo)記特異性。該技術(shù)已成功用于許多系統(tǒng)，包括：哺乳動(dòng)物細(xì)胞（4），細(xì)菌（5），酵母（6），植物（7）和動(dòng)物模型（8）。

使用HaloTag®熒光配體進(jìn)行細(xì)胞成像的優(yōu)勢(shì)在于可以地進(jìn)行標(biāo)記的時(shí)空控制：HaloTag®技術(shù)的模塊化性質(zhì)以及與配體的快速結(jié)合動(dòng)力學(xué)，可以對(duì)蛋白質(zhì)運(yùn)輸和周轉(zhuǎn)進(jìn)行直接成像。由于可用的配體既具有變化的熒光光譜，也具有細(xì)胞滲透和不滲透的特性，因此用戶可以對(duì)標(biāo)記進(jìn)行空間和時(shí)間控制。例如，研究人員只能用不滲透細(xì)胞的配體標(biāo)記膜結(jié)合蛋白的表面池，并跟蹤其生物學(xué)，內(nèi)在化或其他命運(yùn)?；蛘呖梢韵扔靡环N“顏色”的配體標(biāo)記蛋白質(zhì)，然后在一段時(shí)間后再次用含有不同顏色的染料的配體標(biāo)記蛋白質(zhì)。這種脈沖追蹤標(biāo)記允許直接觀察蛋白質(zhì)隨時(shí)間的運(yùn)輸和/或更新。

 

圖1.HaloTag®融合蛋白顯示了與TEV位點(diǎn)成比例的連接子以及與HaloTag®配體共價(jià)相互作用的結(jié)合袋。標(biāo)記活細(xì)胞，然后對(duì)活細(xì)胞或固定細(xì)胞進(jìn)行成像，和/或直接運(yùn)行凝膠進(jìn)行定量：所有HaloTag®熒光配體均允許對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記和成像。根據(jù)您的工作流程需要，可以通過(guò)一個(gè)清洗步驟（一個(gè)小時(shí)內(nèi)）快速完成標(biāo)簽，或者使用無(wú)洗程序進(jìn)行一整夜的標(biāo)簽。由于HaloTag®融合蛋白和配體之間共價(jià)鍵的穩(wěn)定性以及染料本身的穩(wěn)定性，也可以對(duì)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)免疫細(xì)胞化學(xué)方案操作的固定細(xì)胞進(jìn)行成像。這種穩(wěn)定性還允許使用熒光掃描儀通過(guò)SDS-PAGE直接分析標(biāo)記的細(xì)胞。僅設(shè)計(jì)一個(gè)可用于多種應(yīng)用程序的基因構(gòu)建體：無(wú)需設(shè)計(jì)和克隆新的表達(dá)構(gòu)建體即可獲得新功能。除細(xì)胞成像外，相同的融合蛋白還可以純化為單個(gè)純蛋白，或者與它的搭檔一起下拉以發(fā)現(xiàn)新的蛋白相互作用。使用HaloLink™樹(shù)脂從HaloTag®熒光配體轉(zhuǎn)換為HaloTag®純化和下拉系統(tǒng)，可有效捕獲和回收HaloTag®融合蛋白或復(fù)合物。

 

 

用戶要提供的材料（解決方案組合物請(qǐng)參見(jiàn)第9.B節(jié)。）•裝有表達(dá)HaloTag®融合蛋白的細(xì)胞的密閉玻璃蓋罩•37°C時(shí)適合細(xì)胞使用的完整培養(yǎng)基•培養(yǎng)基中缺少酚紅37°C（可選）•1X PBS（pH 7.5，可用于洗滌）•共聚焦顯微鏡或?qū)捯曇盁晒怙@微鏡，配有合適的濾光片組和/或激光器（請(qǐng)參見(jiàn)第9.A節(jié)和圖2）•37°C + CO2細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)箱1.在即將加入細(xì)胞之前，在溫暖的培養(yǎng)基中制備HaloTag®配體的1：200稀釋液。這是5倍的工作液解決方案。 2.用5XHaloTag®配體工作儲(chǔ)備溶液替換現(xiàn)有體積的五分之一，標(biāo)記細(xì)胞，并輕輕混合。因此建議的終標(biāo)記濃度建議為5µM TMR。 3.5µM AlexaFluor®660; 1µM diAcFAM，OregonGreen®或AlexaFluor®488；和10µM香豆素配體。 3.在37°C + CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育15分鐘。 4.對(duì)于可透過(guò)細(xì)胞的配體，請(qǐng)用等體積（或更大體積）的溫暖新鮮培養(yǎng)基（或1X PBS [pH 7.5]）輕輕替換含配體的培養(yǎng)基。重復(fù)兩次，以溫暖的*培養(yǎng)基結(jié)束，共進(jìn)行三遍*漂洗，然后繼續(xù)執(zhí)行步驟5。對(duì)于細(xì)胞不滲透的配體（含AlexaFluor®的配體），請(qǐng)用相等（或更大）的濃度替換含配體的培養(yǎng)基體積的溫?zé)嵝迈r培養(yǎng)基兩次，然后進(jìn)行步驟7。因?yàn)樗鼈儾粷B透細(xì)胞，所以這些配體不需要洗去未結(jié)合的配體。 5.在細(xì)胞培養(yǎng)箱中于37°C + CO2的*培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘，以洗滌未結(jié)合的配體。 6.用等體積的新鮮溫?zé)崤囵B(yǎng)基替換培養(yǎng)基。使用缺少酚紅的培養(yǎng)基可以改善成像效果。 7.轉(zhuǎn)移顯微鏡，并捕獲圖像。

 

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