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全自動環(huán)氧乙烷滅菌柜_EO氣體消毒
目的
測定環(huán)氧乙烷滅菌器(下簡稱滅菌器) 對細(xì)菌芽孢的殺滅能力,以驗證其滅菌性能是否符合原設(shè)計規(guī)定。
試驗器材
(1) 枯草桿菌黑色變種( ATCC 9372 )芽孢菌片。
含菌量要求為5 ×10cfu/片~5 × 10cfu/片(按活菌培養(yǎng)計數(shù)結(jié)果計)。在環(huán)氧乙烷量為600mg/L±30mg/L,溫度為54℃±2℃,相對濕度為60%±10% 條件下,菌片上芽孢存活時間應(yīng)≥7.8min,殺滅時間≤58min,D值為2.6min~5.8min。
(2) 染菌載體( 10mm × 10mm ,以布片為代表,必要時可隨滅菌對象,增用或改用其他載體。
(3) 聚乙烯塑料袋( 封裝菌片用,大小為60mm× 40mm ,厚0.2mm~0.4mm )。
(4) 活菌培養(yǎng)計數(shù)所需器材(見2.1.1.3 )。
(5) 使用說明書中規(guī)定滅菌器可處理的物品(裝填滅菌器,使達(dá)滿載要求)。
全自動環(huán)氧乙烷滅菌柜_EO氣體消毒
操作程序
(1) 根據(jù)試驗要求,制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內(nèi)密封包裝,每袋2片。每次試驗用20袋。
(2) 將滅菌器上、中、下3層,每層內(nèi)、中、外各設(shè)一點(diǎn),共設(shè)9點(diǎn)。每點(diǎn)物品中間布放1袋,共需18袋試驗菌片。另將一袋(2片)菌片放置在室溫條件下作為陽性對照。
(3) 按使用說明書所規(guī)定的環(huán)氧乙烷濃度、作用時間、柜內(nèi)的溫度和相對濕度,在滿載條件下進(jìn)行環(huán)氧乙烷滅菌處理。滿載用物品,隨滅菌器用途而定。處理完畢,取出菌片,分別移種于5 ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),7d后觀察結(jié)果(定性培養(yǎng)檢測)。
對難以判斷結(jié)果的營養(yǎng)肉湯管,取其中0.2ml懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板,用無菌L棒涂抹均勻,置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48h后涂片染色,顯微鏡下觀察菌落形態(tài),或進(jìn)一步做其他試驗,判斷有無生長或生長的是否為試驗菌。若為非試驗菌,則應(yīng)重新進(jìn)行試驗。
(4) 測試中,應(yīng)同時設(shè)立定性和定量陽性對照組與陰性對照組。
(5) 定量陽性對照組,以同批試驗用菌片置室溫下,待消毒或滅菌試驗組達(dá)規(guī)定作用時間后,立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中,各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計數(shù)。
(6) 定性陽性對照組,以同批試驗用菌片置室溫下,待滅菌試驗組達(dá)規(guī)定作用時間后,立即將該菌片2 片,分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,放入溫箱中作定性培養(yǎng),觀察有細(xì)菌生長情況。
(7) 陰性對照組,以同批次試驗用未染菌樣片2 片,分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,同時將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng),觀察有無細(xì)菌生長。
(8) 試驗重復(fù)5 次。
(9)在5次試驗中,每次試驗中的陽性對照菌片,回收菌量均應(yīng)在5×10cfu/片~5×10cfu/片;定性陽性對照組,細(xì)菌生長良好;陰性對照應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對照若有不符合上述要求的結(jié)果,試驗作廢,重新進(jìn)行。
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