小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的分離方法

1. C57BL/6小鼠脫頸處死。

2. 腹部剃毛，75%酒精消毒。

3. 用注射器吸取10mL冷的生理鹽水，提起小鼠腹中部的皮膚和腹膜，讓針頭從提取處穿刺進(jìn)入小鼠腹腔，緩緩?fù)谱⑸睇}水。

4. 輕揉小鼠腹部數(shù)次，靜置3min，使液體在腹腔內(nèi)充分流動(dòng)。

5. 用鑷子提起下腹皮膚，使與腹膜分開(kāi)，在鑷子提取處將皮膚剪開(kāi)一個(gè)小口，再撕開(kāi)整個(gè)腹部皮膚，使腹膜暴露。

6. 將注射器針頭插入縫隙處抽取腹腔液。

7. 將腹腔液在250g下離心5分鐘。

8. 將細(xì)胞重懸在含有10%FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基中，并在37°C、5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育2小時(shí)。

9. 然后去除非貼壁細(xì)胞，用PBS洗滌，分離后立即將腹腔巨噬細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。