免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù) 返回列表頁

免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)的原理與意義：

免疫學(xué)基本原理通過標(biāo)記的特異性抗體(或抗原)對(duì)組織內(nèi)抗原(或抗體)的分別進(jìn)行組織和細(xì)胞原位檢測，從而進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究。

實(shí)驗(yàn)意義：

1.免疫組織化學(xué)可應(yīng)用于惡性腫瘤的病理診斷和科研工作。2.可與組織化學(xué)染色方法的形態(tài)學(xué)診斷相結(jié)合，提高疑難腫瘤的鑒別診斷的準(zhǔn)確率并為腫瘤進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型。 3.指導(dǎo)和提供臨床治療方案的選擇。
免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)的實(shí)驗(yàn)步驟：

1.石蠟切片免疫組化:

①67°C烘箱烘片2小時(shí),常規(guī)脫蠟至水用pH 7.4的PBS沖洗三次。每次3 min ;

②將切片置于沸騰的檸檬酸鹽緩沖液中中檔微波處理10 min蒸餾水沖洗三次。PBS沖洗三次，每次3 min;

③3%H202室溫孵育10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性, PBS)沖洗三次,每次3 min ;

④5~10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉.室溫孵育10 min ,吸去血清后滴加稀釋至適當(dāng)比例的一抗。 37*C孵育1-2 h或者4°C孵育過夜;

⑤PBS沖洗三次每次3 min ;滴加稀釋至適當(dāng)比例的帶標(biāo)記:二抗379C孵育10~30 min ,PBS沖洗三次，每次3 min ;

⑥滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記物工作液379C孵育10-30 min, PBS)沖洗三次。每次3 min;

⑦顯色劑顯色自來水充分沖洗,復(fù)染細(xì)胞核酒精脫水二甲苯透明、中性樹膠封固。

2冰凍切片免疫組化:

①新鮮組織立即在恒冷冰凍切片機(jī)內(nèi)切片厚度為5~6 um ;

②載玻片可不打底裱片后立刻用電吹風(fēng)吹干;

③染色前需用冷*酮4°c固定10-20 min:

④PBS洗2次,每次5 min;.

⑤3%H202滅活內(nèi)源性過氧化物酶20 min ,需遍光處理;

⑥后續(xù)血清封閉與抗體孵育步驟與石蠟切片相似后脫水透明封片進(jìn)行觀察。