骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn) 返回列表頁

大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是干細(xì)胞研究的主要種子細(xì)胞之一。 它能夠成骨、 成脂和成軟分化,并具有很強(qiáng)的增殖能力。研究中使用的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的來源主要是購買商品化細(xì)胞系或者從大鼠股骨和脛骨中提取。
目前,提取大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的主要方法是全骨髓貼壁法。該方法主要利用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞易貼壁的特性將其與其他血細(xì)胞分離開來。主要步驟是將大鼠股骨和脛骨骨髓抽吸出來,然后使用注射器和含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基吹打骨髓組織形成單細(xì)胞懸液,再用200目濾網(wǎng)過濾掉剩余組織塊, 1200rpm離心5分鐘,棄上清,使用5ml含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀,后將單細(xì)胞懸液放入無菌培養(yǎng)瓶中培養(yǎng), 48小時(shí)后換液。該訪法步驟繁瑣,過濾步驟和離心步驟增加了污染的幾率和細(xì)胞的損耗量。離心后大量紅細(xì)胞和干細(xì)胞混雜在一起,影響了干細(xì)胞的貼壁，導(dǎo)致原代細(xì)胞中干細(xì)胞比例較低,培養(yǎng)基營養(yǎng)損耗。