銀染法實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù) 返回列表頁

銀染法是一種用于檢測(cè)蛋白質(zhì)或核酸的生物化學(xué)技術(shù)，其基本原理涉及銀離子的化學(xué)反應(yīng)。以下是銀染法原理的詳細(xì)介紹：

· 銀染法中，銀離子與DNA或蛋白質(zhì)結(jié)合。

· 在堿性pH環(huán)境下，還原劑如甲醛將銀離子還原成金屬銀，這些銀顆粒沉淀在蛋白質(zhì)或DNA的表面上，從而顯色。

· 由于銀染具有很高的靈敏度，它能夠檢測(cè)到凝膠上低于1ng/蛋白質(zhì)點(diǎn)的物質(zhì)，因此廣泛應(yīng)用于2D凝膠分析和極低蛋白含量的測(cè)定中。

此外，銀染中的蛋白質(zhì)吸光度與濃度之間的關(guān)系可用于研究蛋白質(zhì)的某些特殊基團(tuán)，如含硫氨基酸在銀染中的作用表明，不含或只含少量gas殘基的蛋白質(zhì)有時(shí)會(huì)呈現(xiàn)負(fù)染。

銀染法實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1. 固定：將凝膠放入約100ml固定液中，室溫?fù)u動(dòng)20分鐘或40分鐘以上甚至過夜。

2. 洗滌：棄去固定液，加入100ml 30%乙醇或100ml 10%甲醇，室溫?fù)u動(dòng)10分鐘。

3. 增敏：加入100ml銀染增敏液（1X）或100ml銀溶液（1X），室溫?fù)u動(dòng)2分鐘。

4. 洗滌：棄去增敏液，加入200ml MilliQ級(jí)純水或雙蒸水，室溫?fù)u動(dòng)10分鐘。

5. 顯色：加入100ml銀溶液（1X）或顯色液，室溫?fù)u動(dòng)10分鐘。

6. 洗滌：棄去顯色液，加入200ml MilliQ級(jí)純水或雙蒸水，室溫?fù)u動(dòng)1-1.5分鐘。

7. 顯影：根據(jù)顯色結(jié)果，使用顯影液進(jìn)行顯影，直至看到目的蛋白帶