流式檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度 返回列表頁

1.Fluo/Am儲(chǔ)存液配制：將Fluo/Am溶于DMSO，配成終濃度為2mmol/L的儲(chǔ)存液，分裝，-70度凍存。
2.懸浮細(xì)胞染色：收集細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度至2*10^6個(gè)/ml，加Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L,置于，5%CO2。37度避光，孵育30-60min，其間輕輕振蕩幾次，并設(shè)置陰性對照（不加Fluo/Am）。
3.貼壁細(xì)胞染色：以5*10^5個(gè)細(xì)胞種植于24孔培養(yǎng)板中，置于5%CO2。37度培養(yǎng)一段時(shí)間，加入Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L，置于5%CO2。37度避光，孵育30-60min。其間輕輕振蕩幾次，并設(shè)置陰性對照。
4.取出細(xì)胞或消化細(xì)胞，離心1500r/min 10min，去除多余染料，再用無鈣緩沖液沖洗PBS反復(fù)離心洗滌2次，最后用無鈣PBS重懸至0.5ml。
5.進(jìn)行流式檢測分析
結(jié)果分析：用488mm激發(fā)，F(xiàn)LI-H熒光通道收集熒光信號，收集1*10^4個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)鈣的濃度用平均熒光表示。