細(xì)胞劃痕實驗 返回列表頁

實驗步驟

標(biāo)記六孔板

用marker筆在六孔板底部畫平行線，平行線之間的距離0.5cm，為了保證后續(xù)拍照位置是相同的；

鋪板

細(xì)胞重懸鋪板，密度控制在第二天長滿，若過夜后細(xì)胞wq長滿，也可以適當(dāng)延長培養(yǎng)時間，但如果細(xì)胞密度已經(jīng)很大，盡量重新鋪板，因為可能過一天后細(xì)胞太滿，會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)逐漸變差，后續(xù)細(xì)胞可能不遷移而是凋亡；

制造劃痕

第二天用直尺比著使用10ul槍頭制造劃痕，劃痕方向與標(biāo)志線垂直，最好保持力度一致，盡量一次性劃完，然后PBS沖洗3次，洗去漂浮的細(xì)胞

為了減少細(xì)胞增殖所引起的假陽性結(jié)果，降低細(xì)胞增殖對實驗結(jié)果的影響，將wq培養(yǎng)基換成無血清培養(yǎng)基和低血清培養(yǎng)基（FBS＜2%繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞）；

拍照

拍照前最好用PBS沖洗3次，一般認(rèn)為24h為細(xì)胞的一個周期，所以檢測時間最好不要超過一個周期的時間，按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕