RNA-seq實(shí)驗(yàn) 返回列表頁

RNA-seq實(shí)驗(yàn)原理及過程：

轉(zhuǎn)錄組是某個(gè)物種或者特定細(xì)胞類型產(chǎn)生的所有轉(zhuǎn)錄本的集合。轉(zhuǎn)錄組研究能夠從整體水平研究基因功能以及基因結(jié)構(gòu)，揭示特定生物學(xué)過程以及**發(fā)生過程中的分子機(jī)理。

先將樣品提取總RNA，在這之后，除去rRNA（對(duì)于真核生物，用帶有Oligo(dT)的磁珠富集mRNA，對(duì)于原核生物，用試劑盒去除rRNA），向得到的mRNA中加入Fragmentation Buffer使其片斷成為短片段，再以片斷后的mRNA為模板，用六堿基隨機(jī)引物(random hexamers)合成cDNA**鏈，并加入緩沖液、dNTPs、RNase H 和DNA polymerase I 合成cDNA第二鏈，經(jīng)過QiaQuick PCR試劑盒純化并加 EB緩沖液洗脫經(jīng)末端修復(fù)、加堿基A，加測序接頭，再經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳回收目的大小片段，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而完成整個(gè)文庫制備工作，構(gòu)建好的文庫用Illumina HiSeq2000進(jìn)行測序。