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課題實驗: 課題服務(wù) 實驗外包課題實驗細(xì)胞課題

細(xì)胞株

高通量測序

基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的催化下加上熒光素（FITC）標(biāo)記的dUTP （fluorescein-dUTP），從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進行檢測，這就是TUNEL （TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）法檢測細(xì)胞凋亡的原理

TUNEL檢測的原理:

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進行檢測，這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細(xì)胞凋亡的原理。

TUNEL檢測（石蠟切片）	取下適當(dāng)?shù)男迈r的組織塊固定于4%-10%濃度的多聚甲醛或中性甲醛中，甲醛與組織塊體積比在10:1和20:1之間，4攝氏度保存運輸；
TUNEL檢測（冰凍切片）	取下的新鮮組織應(yīng)立即放入超低溫冰箱或者液氮中，用干冰運輸，固定好的切片應(yīng)于-80或者-20度保存，并盡快用于檢測；
TUNEL檢測（細(xì)胞爬片）	細(xì)胞爬片4%多聚甲醛4度固定30min，換PBS緩沖液4度保存運輸，盡快用于檢測；

熒光法需要先拍一張凋亡熒光圖，再拍一張原位染核圖，再合并圖層，終我們提供的為三張熒光圖片。

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