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ALT生化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)原理:
丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT),又稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT),在37C、 pH7. 4的條件下,可催化基質(zhì)(底物)液中的丙氨酸與a-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸:生成的丙酮酸可與起終止和顯色作用的2, 4二硝基苯肼發(fā)生加成反
應(yīng),生成丙酮酸-2, 4-二硝基苯腙,進(jìn)而在堿性環(huán)境中生成紅棕色的苯腙硝醌化合物,其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與丙酮酸的生成量,亦即與ALT活性的高低成正比關(guān)系。據(jù)此與同樣處理的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液相比較,便可算出或通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出血清中ALT的活性.
ALT生化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)注意事項(xiàng):
1、比色法中常用的有賴氏(Rei tman-Franke1)法及金氏(King)法。賴氏法標(biāo)準(zhǔn)曲線所定單位數(shù),是用實(shí)驗(yàn)方法和卡門氏分光光度法(速率法)作對(duì)比測(cè)定求得的。以卡門氏單位報(bào)告結(jié)果,比較準(zhǔn)確??ㄩT氏單位定義為: 1ml血清,反應(yīng)液總?cè)萘?ml,波長(zhǎng)340nm,1cm光徑,25"C, 1min內(nèi) 所生成的丙酮酸,使NADH氧化成NAD* 而引起吸光度每下降0. 001為一個(gè)單位(1卡門氏單位=0.482 IU/L,25C)。
2、一般血清標(biāo)本內(nèi)源性丙酮酸很少,個(gè)體相差也不大,作大批標(biāo)本測(cè)定時(shí),不需每份標(biāo)本都作對(duì)照管,嚴(yán)重脂血、黃疽、溶血及陳舊血清須作自身對(duì)照管。建議對(duì)活力單位超過(guò)正常尤其是在臨界時(shí),進(jìn)行復(fù)測(cè):復(fù)測(cè)時(shí)每份標(biāo)本均作對(duì)照管。
3、酶活力超過(guò)150單位時(shí),用鹽水稀釋血清后重測(cè)。
4、應(yīng)將一般血清的對(duì)照管(或稱標(biāo)本空白管)的吸光度作為日常質(zhì)控的指標(biāo)之一;如相差大,可考慮a-酮戊二酸濃度、DNPH濃度及儀器等原因引起。
5、血清中ALT在室溫(25"C) 可保存2天,在4C可保存-周,在-25"C可保存1個(gè)月。
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