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干擾慢病毒構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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更新時(shí)間:2024-12-26 21:00:07

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干擾慢病毒構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)是伊萊博生物的特色服務(wù)項(xiàng)目之一,由專業(yè)的技術(shù)人員操作完成。

RNA干擾(RNA interference,RNA i)是通過抑制轉(zhuǎn)錄后水平的基因表達(dá)而誘導(dǎo)功能缺失表型的有力工具。由ds RNA(double-stranded RNA)引發(fā)的特定基因表達(dá)受抑制現(xiàn)象稱為RNA干擾作用。 ds RNA(double-stranded RNA)可以介導(dǎo)基因沉默作用,以ds RNA為基點(diǎn)研究基因沉默的分子機(jī)制成為熱點(diǎn)。ds RNA指的是大于30個(gè)堿基對(duì)的RNA分子。哺乳動(dòng)物細(xì)胞有至少2條路徑競爭雙鏈RNA(ds RNA),其一是特異性路徑:特殊ds RNA的序列用于RNAi,起始階段ds RNA被切成si RNA(small interfering RNA 或short interfering RNAs)。siRNA是RNA干擾作用賴以發(fā)生的重要中間效應(yīng)分子,能提供一定的信息,允許一個(gè)特定的m RNA被降解。Si RNA正義鏈與反義鏈各有21個(gè)堿基,其中19個(gè)堿基配對(duì),再每條鏈的3’端都有2個(gè)不配對(duì)的堿基。 另一條是非特異性路徑:只要有長的ds RNA的存在它可以降解所有的RNA,抑制所有蛋白質(zhì)的合成。長的ds RNA激活蛋白激酶PKR,激活的PKR通過一系列的磷酸化關(guān)閉翻譯起始因子,導(dǎo)致翻譯抑制。也可以通過激活2’-5’AS 合成一個(gè)分子激活RNase L,導(dǎo)致非特異的RNA降解。 關(guān)于特異性的RNA作用機(jī)制模型,包括起始階段和效應(yīng)階段。起始階段ds RNA在Dicer酶(RNase III家族中特異識(shí)別雙鏈RNA的一員,屬內(nèi)切核酸酶)的作用下加工裂解21-23核甘酸長的小分子干擾RNA的片斷(siRNA)。Dicer含有解旋酶活性以及ds RNA結(jié)合域和PAZ結(jié)構(gòu)。 在RNAi 的效應(yīng)階段,siRNA雙鏈結(jié)構(gòu)解旋并形成有活性的蛋白/RNA復(fù)合物(RISC)。由RISC中siRNA反義鏈與m RNA互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合,隨后切割m RNA從而達(dá)到在RNA水平干擾基因表達(dá)。RISC由多種蛋白成分組成,包括核酸酶,解旋酶和同源RNA鏈搜索活性等

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