實(shí)驗(yàn)步驟
1.石蠟切片免疫組化:

①67°C烘箱烘片2小時(shí),常規(guī)脫蠟至水用pH 7.4的PBS)沖洗E次。每次3 min ;②將切片置于沸騰的檸檬酸鹽緩)沖液中中檔微波處理10 min，蒸餾水沖洗三E次。PBS沖洗 E次每次3 min;③)3%H202室溫孵育10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性, PBS)沖洗三次,每次3 min ;④5~10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉.室溫孵育10 min ,吸去血清后滴加稀釋至適當(dāng)比例的一抗。37°C孵育1-2 h或者4°C孵育過夜;⑤PBS沖洗三次每次3 min滴加稀釋至適當(dāng)比例的帶標(biāo)記:二抗379C孵育10~30 min，PBS沖洗三次每次3 min ;⑥滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記物工作液379C孵育10-30 min, PBS沖洗三E次。每次3 min;⑦顯色劑顯色自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染細(xì)胞核酒精脫水二甲苯透明、中性樹膠封固。

2冰凍切片免疫組化:
①新鮮組織立即在恒冷冰凍切片機(jī)內(nèi)切片厚度為5~6 um;
②載玻片可不打底裱片后立刻用電吹風(fēng)吹干;
③染色前需用冷*酮4°c固定10-20 min:
④PBS洗2次,每次5 min;.
⑤)39%H202滅活內(nèi)源性過氧化物酶20 min，需遍光處理;
⑥后續(xù)血清封閉與抗體孵育步驟與石蠟切片相似后脫水透明封片進(jìn)行觀察。