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細胞毒性是由細胞或化學物質引起的單純細胞殺傷事件,不依賴于凋亡或壞死的細胞死亡機理。有時需要進行特定物質細胞毒性的檢測,比如藥物篩選。
細胞毒性檢測主要是根據細胞膜通透性發(fā)生改變來進行的檢測,常用以下幾種方法:
MTT、XTT法:利用線粒體內部酶的活性,可以將特定的四唑鹽類進行轉化,然后通過酶標儀進行檢測
LDH的方法:通過檢測細胞培養(yǎng)上清中LDH的酶活性,來檢測細胞毒性
其它酶方法:如檢測上清中堿性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等
細胞增殖能力分析試劑盒
原理:正常細胞代謝旺盛,其線粒體內的琥珀酸脫氫酶,可將四唑鹽類物質(如 MTT、XTT、WST-1等 )還原為紫色的結晶狀的物質,沉積在細胞周圍,然后通過酶標儀讀取OD值,從而檢測到細胞增值狀態(tài)
熒光素發(fā)光法細胞生存能力檢測
原理:腺苷酸激酶(AK)存在于所有真核和原核細胞的胞漿中,AK具有激活ADP生成ATP。當細胞受損后,細胞膜發(fā)生破損,AK會釋放到培養(yǎng)上清中。該試劑盒利用熒光素酶和熒光素在ATP作用下可以發(fā)光,通過化學發(fā)光儀可以定量進行檢測。
LDH法細胞毒性檢測
原理:LDH(乳酸脫氫酶)是一種穩(wěn)定的蛋白質,存在于正常細胞的胞質中,一旦細胞膜受損,LDH即被釋放到細胞外; LDH催化乳酸形成丙酮酸鹽,和INT(四唑鹽類)反應形成紫色的結晶物質,可通過500nm酶標儀進行檢測。通過檢測細胞培養(yǎng)上清中LDH的活性,可判斷細胞受損的程度
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