測(cè)定意義:
尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物，在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一。
測(cè)定原理:
在堿性條件下，尿酶水解尿素產(chǎn)生氨，氨與次氯酸反應(yīng)生成氯胺，再與酚衍生物作用生成綠色吲哚酚，在630nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。試劑組成和配制: .
標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mLX1支，4'C保存。
試劑一:粉劑X1瓶，4'C避光保存，臨用前加10mL 蒸餾水充分溶解。
試劑二:液體20mLX1瓶，4C避光保存。
試劑三:液體20mLX1瓶，4C避光保存。
樣品處理:
1.組織:按照質(zhì)量(g): 蒸餾水體積(mL)為1: 5~10的比例(建議稱取約0.1g，加入1mL蒸
餾水)加入蒸餾水，勻漿后于25C，10000g 離心10min，取上清待測(cè)。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(10個(gè)):蒸餾水體積(mL)為500^ 1000: 1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)
胞加入1mL蒸餾水),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min);
然后4C，10000g 離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3.血清或其它液體:直接檢測(cè)。