石蠟切片tunel實(shí)驗(yàn)步驟

1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯I15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇I5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。

2、 修復(fù): 切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈，在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液覆蓋組織，37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。

3、 破膜:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育20min，將玻片置于PBS中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。

4、 加試劑1,2 :按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1和試劑2按2:29混合，加到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃水浴鍋孵育2小時(shí)，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。

5、DAPI復(fù)染細(xì)胞核:切片用PBS(PH7.4)洗滌3次，每次5min。去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

6、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

7、 鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。