原位雜交實驗 返回列表頁

原位雜交（In situ hybridization）是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。根據(jù)所用探針和靶核酸的不同，原位雜交可分為DNA-DNA雜交，DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交三類。按其作用方式分為固相雜交和液相雜交。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH）是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術(shù)，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導(dǎo)分子（reporter molecule）結(jié)合，雜交后再通過免疫細胞化學(xué)過程連接上熒光染料。FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析。

基本步驟：

1.        玻片的準備和樣品固定

2.        細胞或組織的預(yù)滲透處理

3.        靶DNA變性（DNA原位雜交）

4.        探針制備

5.        原位雜交過程

6.        雜交后洗滌

7.        探針（顯色）檢測