原位雜交實(shí)驗(yàn) 返回列表頁(yè)

原位雜交（In situ hybridization）是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。根據(jù)所用探針和靶核酸的不同，原位雜交可分為DNA-DNA雜交，DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交三類。按其作用方式分為固相雜交和液相雜交。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH）是在20世紀(jì)80年代末在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導(dǎo)分子（reporter molecule）結(jié)合，雜交后再通過免疫細(xì)胞化學(xué)過程連接上熒光染料。FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異性結(jié)合來檢測(cè)DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析。

基本步驟：

1.        玻片的準(zhǔn)備和樣品固定

2.        細(xì)胞或組織的預(yù)滲透處理

3.        靶DNA變性（DNA原位雜交）

4.        探針制備

5.        原位雜交過程

6.        雜交后洗滌

7.        探針（顯色）檢測(cè)