詳細介紹
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點:
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Aspergillus fumigatus |
貨號 | CP933906 |
產(chǎn)品特征:
煙曲霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,抑制非特異性擴增 。
重復性好:擴增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴增效率高:擴增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,產(chǎn)品僅用于科研使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是煙曲霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
差向四環(huán)素標準品人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)ELISA Kit,48T/96T
依普菌素標準品人葡萄糖激酶(GCK)ELISA Kit,48T/96T
氟哌噻噸標準品人血管生成素4(ANG-4)ELISA Kit,48T/96T
骨化醇標準品小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA Kit,48T/96T
磺酸雙麥角堿標準品大鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA Kit,48T/96T
馬來酸麥角新堿標準品人激肽釋放酶11(KLK 11)ELISA Kit,48T/96T
麥角固醇標準品大鼠白細胞分化抗原44(CD44)ELISA Kit,48T/96T
酒石酸麥角標準品兔阿霉素(ADR)ELISA Kit,48T/96T
麥角異胺標準品人神經(jīng)生長導向因子Slit2 ELISA Kit,48T/96T
異抗壞血酸標準品小鼠神經(jīng)生長導向因子Slit2 ELISA Kit,48T/96T
赤蘚糖醇標準品人多巴胺D2受體(D2R)ELISA Kit,48T/96T
紅霉素標準品大鼠多巴胺D2受體(D2R)ELISA Kit,48T/96T
紅霉素B標準品人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)ELISA Kit,48T/96T
紅霉素C標準品人凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA Kit,48T/96T
紅霉素相關(guān)物質(zhì)N標準品大鼠凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA Kit,48T/96T Fetuin beta 胎球蛋白B抗體(Fetuin β)舒林酸
煙曲霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒FES 原癌基因酪氨酸蛋白激酶FES抗體替硝唑
Ferritin Light Chain 鐵蛋白輕鏈抗體酮洛芬
Ferritin 鐵蛋白抗體硝苯地平
FER/TYK3 酪氨酸蛋白激酶3抗體硝苯地平雜質(zhì)A
FEN1 結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1抗體硝苯地平雜質(zhì)B
FEM1A 前列腺素E受體4相關(guān)蛋白抗體鹽酸利多卡因
FEM 1B FEM1B抗體利多卡因
FECH/Ferrochelatase 鐵螯合酶抗體鹽酸妥拉唑林
FDC-SP/ADC 濾泡樹突細胞分泌蛋白抗體鹽酸硫利達嗪
FCHSD1 FCHSD1蛋白抗體鹽酸卡替洛爾
FCAR/CD89 免疫球蛋白A Fc段受體1抗體黃豆苷元
Fc ε RIα/Fc epsilon RI FC段IgE受體α多肽抗體7-氧基-4’-羥基異黃酮
Fc γ RII a/CD32 免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體二磺酸阿米三嗪
Fc γ RII a/CD32 免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體蘿巴新