詳細介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,抑制非特異性擴增 。
重復(fù)性好:擴增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴增效率高:擴增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Bacillus anthracis |
貨號 | CP933932 |
炭疽芽孢桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,產(chǎn)品僅用于科研報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果。
以下是炭疽芽孢桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
鹽酸伊立替康雜質(zhì)D對照品標(biāo)準(zhǔn)品大鼠高敏狀腺素(u-T4)ELISA Kit,48T/96T
厄貝沙坦標(biāo)準(zhǔn)品犬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/DLA)ELISA Kit,48T/96T
厄貝沙坦相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品豚鼠主要組織相容性復(fù)合體(MHC/GPLA)ELISA Kit,48T/96T
氧基肉桂酸異戊酯標(biāo)準(zhǔn)品人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA Kit,48T/96T
酸異酯標(biāo)準(zhǔn)品小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA Kit,48T/96T
異卡波肼標(biāo)準(zhǔn)品豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/SLAⅠ)ELISA Kit,48T/96T
鹽酸異腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-1Ⅰ)
炭疽芽孢桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒酸異氟潑尼龍標(biāo)準(zhǔn)品兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)ELISA Kit,48T/96T
異氟烷標(biāo)準(zhǔn)品恒河猴主要組織相容性復(fù)合體(MHC/RhLA)ELISA Kit,48T/96T
異氟烷相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品人核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA Kit,48T/96T
異氟烷相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA Kit,48T/96T
L-異亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)品小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA Kit,48T/96T
異馬拉硫標(biāo)準(zhǔn)品大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA Kit,48T/96T
異麥芽酮糖醇標(biāo)準(zhǔn)品人apelin 12(AP12)ELISA Kit,48T/96T
帕拉金糖標(biāo)準(zhǔn)品小鼠apelin 12(AP12)ELISA Kit,48T/96T EAAT3 膠質(zhì)細胞谷氨酸運載蛋白3抗體(神經(jīng)/上皮細胞谷氨酸運載蛋白)酸吡哆醛咯地爾
EAAT2 膠質(zhì)細胞谷氨酸運載蛋白2抗體酸吡哆醛
EAAT1/Glast 膠質(zhì)細胞谷氨酸運載蛋白1抗體硝呋太爾
E4F1 E4F轉(zhuǎn)錄因子1抗體硝呋太爾雜質(zhì)A
E3 ubiquitin ligase/RNF218 E3泛素連接酶抗體硝呋太爾雜質(zhì)B
E2F8 轉(zhuǎn)錄因子E2F8抗體醋谷胺
E2F6 轉(zhuǎn)錄因子E2F6抗體蒙脫石
E2F5 轉(zhuǎn)錄因子E2F-5抗體拉呋替
E2F4 轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗體伏立康唑
E2F3 轉(zhuǎn)錄因子E2F-3抗體奧美沙坦酯
E2F2 轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體鹽酸齊拉西酮
E2F1 轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體鹽酸羅哌卡因
E2EPF 泛素交聯(lián)酶抗體右旋鹽酸羅哌卡因
E2 tag E2 tag標(biāo)簽抗體佐匹克隆
E1 glycoprotein 風(fēng)疹病糖蛋白抗體右佐匹克隆