詳細介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,抑制非特異性擴增 。
重復性好:擴增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴增效率高:擴增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Aspergillus flavus |
貨號 | CP933905 |
黃曲霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,產(chǎn)品僅用于科研報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強。預期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結果。
以下是黃曲霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關產(chǎn)品:
恩曲他濱系統(tǒng)適用性混合物B標準品大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2(CAMK 2)ELISA Kit,48T/96T
馬來酸依那普利標準品人二胺氧化酶(DAO)ELISA Kit,48T/96T
內(nèi)素標準品小鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA Kit,48T/96T
恩氟烷標準品豬二胺氧化酶(DAO)ELISA Kit,48T/96T
肝素標準品人抗鈣調(diào)素特異抗體(CAM-ab)ELISA Kit,48T/96T
依諾肝素鈉溶液用于生物測定標準品豬鈉-葡萄糖共轉運載體1(SGLT1)ELISA Kit,48T/96T
依諾肝素鈉分子量校準B標準品豬葡萄糖轉運蛋白2(GLUT2)ELISA Kit,48T/96T
恩諾沙星標準品人8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA Kit,48T/96T
恩諾沙星相關物質(zhì)合標準品小鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA Kit,48T/96T
恩他卡朋標準品大鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA Kit,48T/96T
恩他卡朋相關物質(zhì)A標準品人單胺氧化酶(MAO)ELISA Kit,48T/96T
4-差向脫水四環(huán)素標準品小鼠白介素7(IL-7)ELISA Kit,48T/96T
(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯標準品大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA Kit,48T/96T
表乳酸標準品人血管緊張素Ⅰ受體抗體(ANG-ⅠR)ELISA Kit,48T/96T
黃曲霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒酒石酸腎上腺素標準品人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA Kit,48T/96T FGF23 成纖維細胞生長因子23抗體倍他環(huán)糊精
FGF22 成纖維細胞生長因子22抗體卡托普利
FGF21 成纖維細胞生長因子21抗體卡托普利二硫化物
FGF20 成纖維細胞生長因子20抗體卡前列酯
FGF19 成纖維細胞生長因子19抗體卡鉑
FGF18 成纖維細胞生長因子18抗體氮平
FGF17 成纖維細胞生長因子17抗體林旦
FGF16 成纖維細胞生長因子16抗體碘羥喹
FGF14 成纖維細胞生長因子14抗體聯(lián)苯芐唑
FGF13 纖維母細胞生長因子13抗體聯(lián)苯芐醇
FGF12 成纖維細胞生長因子12抗體萘普生鈉
FGF11 成纖維細胞生長因子11抗體撲米酮
FGF10 成纖維細胞生長因子10抗體葡萄糖酸鋅
FGF1/AFGF 酸性成纖維細胞生長因子抗體曲安西龍
FEZ1 腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體雙芬酸鈉