詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng):采用熱啟動酶的激活機(jī)制,抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好:擴(kuò)增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高:擴(kuò)增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Chlamydophila pecorum |
貨號 | CP934063 |
獸類嗜衣原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,產(chǎn)品僅用于科研報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
以下是獸類嗜衣原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
1,4-雙(2-氰基苯烯基)苯人大腸癌專一抗原2(CCSA-2)ELISA Kit,48T/96T
4--1H-吡咯并[2,3-C]吡啶猴B病(BV)ELISA Kit,48T/96T
1,3-二基-4-哌啶酮人肌抑素(MSTN)ELISA Kit,48T/96T
3-氧基苯酞人可溶性CD44變體9(sCD44-v9)ELISA Kit,48T/96T
3-聯(lián)苯醇大腸桿菌宿主殘留蛋白檢測試盒(E.coli P)ELISA Kit,48T/96T
(S)-2-氨基-1-Cbz-吡咯烷人高爾基蛋白73(GP-73)ELISA Kit,48T/96T
2-咪唑醛大鼠孕酮受體(PROGR)ELISA Kit,48T/96T
A-D-葡萄吡喃糖-水合物人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子抗體(GM-CSF Ab)
4-氰基-2-氟苯醛人血漿抗凝蛋白C(PC) ELISA Kit,48T/96T
2,5-二對二苯酸人血漿抗凝蛋白S(PS) ELISA Kit,48T/96T
N-酸酯羅沼蝦諾達(dá)病(MrNV)ELISA Kit,48T/96T
2--6-氟苯醛紅螯光殼螯蝦卵黃脂蛋白(Lv/Vn)ELISA Kit,48T/96T
三叔氧基化鋁鋰魚卵黃高蛋白(PV)ELISA Kit,48T/96T
對氟苯酸酯雞蛋卵黃高蛋白酸肽(PPP)ELISA Kit,48T/96T
獸類嗜衣原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2--4-硝基苯醚家蠶卵黃蛋白(LT)ELISA Kit,48T/96T ART3 二酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶3抗體沒藥(天然沒藥)
ARSK 芳香基硫酸酯酶K抗體靈芝(赤芝)
ARSH 芳香基硫酸酯酶H抗體陳皮
ARSF 芳香基硫酸酯酶F抗體乳香
ARSB 芳基硫酸酯酶B抗體南板藍(lán)根
ARSA 芳香基硫酸酯酶1抗體浙貝母
ARSA 芳基硫酸酯酶A抗體黃芪(蒙古黃芪)
ARRDC4 抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體黑豆
ARRDC3 抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體山豆根
ARRDC2 抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體北豆根
ARRDC1 抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體白鮮皮
ARP4 肝血管生成素相關(guān)蛋白抗體羅布麻葉
Aromatase 芳香化酶抗體虎杖
Aromatase 芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體枳殼(酸橙)
ARNT2 芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體麝香