詳細介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,抑制非特異性擴增 。
重復性好:擴增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴增效率高:擴增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Fonsecaea spp. |
貨號 | CP934246 |
著色霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,產(chǎn)品僅用于科研報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強。預期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果。
以下是著色霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
對磺基苯偶氮變色酸鈉 細胞蛋白表達熒光定量檢測試盒-LEPTIN
3--4-苯腈 蛋白表達西方雜交分析試盒-LEPTIN
4-基鄰苯二酸 蛋白免疫共沉淀分析試盒-LEPTIN
(S)-1-Cbz-3-氨基吡咯鹽酸鹽 細胞/組織裂解懸液、血液、體液等蛋白表達ELISA定量檢測試盒-LEPTIN
3-氟-5-羥基苯酸 FITC綠色熒光標記一抗
3-苯酰腈TRITC紅色熒光光標記一抗
4'-正戊基-4-氰基聯(lián)苯HRP標記一抗
2-(4-代苯基)-2-基酸通用細胞載玻片制備試盒
2-硝基-4-砜基苯細胞免疫熒光顯微鏡基礎(chǔ)檢測試盒(無一抗和二抗)
1-(氧基氧基)萘細胞免疫熒光顯微鏡間接檢測試盒(含熒光二抗)
3,4-二氟三氟苯細胞免疫熒光顯微鏡*間接檢測試盒(含一抗和熒光二抗)
3-基磺酸鈉免疫熒光細胞流式儀基礎(chǔ)檢測試盒(無一抗和二抗)
4-羥基-2,2,6,6-四基哌啶1-氧基自由基免疫熒光細胞流式儀間接檢測試盒(含熒光二抗)
著色霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒N-基對基苯璜酰胺免疫熒光細胞流式儀*間接檢測試盒(含一抗和熒光二抗)固相內(nèi)素清除Surface Endotoxin Erasol常溫100g
固相內(nèi)素清除Surface Endotoxin Erasol常溫500g
固相RNase清除Surface RNase Erasol常溫100mL
固相RNase清除Surface RNase Erasol常溫250mL
固綠Fast Green FCF室溫干燥保存5g
固藍 RR 鹽Fast Blue RR Salt-20℃保存5g
固藍 BB 鹽Fast Blue BB Salt -20℃避光保存5g
鈷柱介質(zhì)Co-Agarose Resin4℃保存10mL
骨骼肌細胞生長因子Growth Factor For Cell Culture-20℃保存5mL
谷胱甘肽一還原酶測試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存50 T