詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高:能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng):采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好:擴(kuò)增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高:擴(kuò)增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Pseudocowpox Virus(PCPV) |
貨號(hào) | CP934637 |
偽牛痘病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
檢測(cè)方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br/>探針完整時(shí),產(chǎn)品僅用于科研報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn):
1.即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
以下是偽牛痘病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
Tetracycline 四環(huán)素抗體人甘氨酸ELISA試盒
TET2 基雙加氧酶TET2抗體人干細(xì)胞因子受體(SCFR)ELISA試盒
TET1/CXXC6 Ten-eleven轉(zhuǎn)運(yùn)基因1蛋白抗體人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)ELISA試盒
Testis 腫瘤抑制基因Testin抗體人干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1(IFITM1/CD225/IFI17)ELISA試盒
TERT/EST2/Telomerase reverse transcriptase 端粒酶相關(guān)蛋白2抗體(端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶)人干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試盒
TERT 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶抗體人干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞趨化因子(ITAC/CXCL11)ELISA試盒
TEP1 端粒酶相關(guān)蛋白1抗體人干擾素活化基因205(Ifi205)ELISA試盒
Tenascin C/Tn-C 細(xì)胞粘合素(固生蛋白)抗體人干擾素調(diào)節(jié)因子8(IRF8)ELISA試盒
Tenascin C (C terminal) 細(xì)胞粘合素抗體(C端)腱糖蛋白-C(固生蛋白)抗體人干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF3)ELISA試盒
TEM7R/Plxdc2 腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記相關(guān)蛋白質(zhì)7抗體人干擾素a-抗體(Anti-IFN-ab)ELISA試盒
TEM1/CD248 內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液酸蛋白抗體人鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶2C型成員1(ATP2C1)ELISA試盒
Telomerase Binding Protein, P23 端粒酶結(jié)合蛋白P23抗體人鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1(CNR-1)ELISA試盒
偽牛痘病毒探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒TEF4/TEA domain family member 2 轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF4抗體人鈣依賴性胞漿型脂酶A2(iPLA2)ELISA試盒
TEF3/TEAD4 轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體人鈣衛(wèi)蛋白ELISA試盒
TECTB 遺傳性耳聾β-tectorin抗體人鈣網(wǎng)蛋白(CRT)ELISA試盒2-氨基-5-二苯酮(氮卓雜質(zhì)I)2-Amino-5-chlorobenzophenone50mg/支,供有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)作對(duì)照用
2-氨基-5-苯酰苯并咪唑Mebendazole-amine(HMEB)50mg
2-氨基-2’,5-二二苯酮(勞拉西泮雜質(zhì)B)2-Amino-2’5-dichlorobenzophenone100mg,供HPLC法檢查用
2-氨基-2’,5-二二苯酮(勞拉西泮雜質(zhì)B)2-Amino-2’5-dichlorobenzophenone100mg,供HPLC法檢查用
2XXX系列(LY12)A1-Cu-Mg-Mn塊狀,有證書(shū)
2XXX系列(LD7.8) A1-Cu-Mg-Fe-Ni塊狀,有證書(shū)
2-NP-SCA-13C,15N22-NP-SCA-13C,15N210mg
2-NP-SCA,有證書(shū)2-NP-SCA,有證書(shū) ,100mg
2-NP-SCA2-NP-SCA[16004-43-6]100mg
2-NP-AOZ-D42-NP-AOZ-D410mg