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詳細介紹
K599 Competent Cell： 100μl/支
pCAMBIA2301(control vector, 10ng/μl) 10μl
保存條件(保質期)： -80℃（12個月）
基因型
Agrobacterium rhizogenes (strR ) pRi2659 (agropine type)
產品說明
發(fā)根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。K599發(fā)根農桿菌（NCPPB2659）含有pRi2659農桿堿型Ri質粒，具有廣泛的宿主范圍（葫蘆科，豆科，茄科等），同時具有鏈霉素抗性。本公司生產的K599化學轉化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301質粒（卡那霉素抗性）檢測，轉化效率>103 cfu/μg DNA。
常規(guī)操作方法
1.取-80℃保存的K599發(fā)根農桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
2. 每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質粒DNA（轉化效率較高，一次使用前好做預實驗確定所加質粒的量），用手快速、劇烈打管底混勻或用槍吹吸混勻，依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 冰浴中拿出放室溫，加入700μl 無抗生素的TY液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2小時。
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 TY平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3 天
● 農桿菌相關抗生素配方：
抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
羧芐青霉素 (carb) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
硫酸卡那霉素 (kan) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
鏈霉素 (strep) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
利福平 (rif) | DMSO溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
慶大霉素 (gent) | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
氯霉素（cam） | 無水乙醇溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 | 34 mg/ml | 34 ug/ml |
常用農桿菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
農桿菌菌株 | 羧芐青霉素(carb) | 鏈霉素(strep) | 利福平(rif) | 氯霉素(cam) | 硫酸卡那霉素(kan) |
Ar.A4 | S | S | S | S | R |
MSU440 | S | R | S | S | S |
Ar.Qual | S | R | S | R | S |
C58C1 | S | R | R | S | S |
ATCC15834 | S | S | S | S | S |
K599 | S | R | S | S | S |
Ar.1193 | R | R | R | S | S |
● TY配方（1L）：
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
補水到1L體積，*溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌
配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌
每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。
若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉。
注意事項
1. 加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數(shù)量級。
2. 混勻質粒時應用手指快速打管底或用槍吹吸混勻，務必使質?？焖佟⒕鶆蚍稚㈤_，與感受態(tài)細胞充分接觸。轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量或降低涂板的菌量。
4. K599具有鏈霉素抗性，不可用于具有鏈霉素抗性質粒的轉化。
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