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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
NovaBlue(DE3)來(lái)源于 K12 菌株，具有高的轉(zhuǎn)化效率，是轉(zhuǎn)化效率高的原核表達(dá)菌株，可同時(shí)
用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建和蛋白的原核表達(dá)。NovaBlue(DE3)菌株染色體 DNA 中整合了噬菌體 λDE3 序
列，使得 NovaBlue(DE3)菌株可用于 pET 系列、pGEX、pMAL 等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。NovaBlue(DE3)
菌株具有四環(huán)素抗性，endA1 和 recA1 的突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取；
lacZΔM15 突變使得 NovaBlue(DE3)可用于藍(lán)、白斑實(shí)驗(yàn)篩選。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè)，NovaBlue
(DE3)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA 以上。
產(chǎn)品組成
組分
NovaBlue(DE3)
感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- [proA+B+ lacI q ZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12- mk12+) supE44 thi -1 recA1 gyrA96 relA1 lac (DE3)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存，請(qǐng)勿將本品置于-20℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
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