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詳細介紹
產(chǎn)品簡介
M15(pREP4)蛋白表達菌株含有 pREP4 質(zhì)粒，該質(zhì)粒通過 p15A 復(fù)制子啟動復(fù)制，可以與許多原核
表達質(zhì)粒共存于同一大腸桿菌細胞中；同時該質(zhì)粒攜帶 lacI 基因，可高效表達 LacI 抑制蛋白，在
IPTG誘導(dǎo)前可抑制目標蛋白的本底表達，特別適合毒性基因的表達。M15(pREP4)菌株是 PQE系列
質(zhì)粒的配套菌株，特別適合 PQE 系列質(zhì)粒或由 E. coli T5 啟動子驅(qū)動蛋白表達的質(zhì)粒。pREP4 質(zhì)粒
賦予該菌株卡那m素抗性。吐露港生產(chǎn)的 M15(pREP4)感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC18 質(zhì)粒檢
測轉(zhuǎn)化效率達 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
M15(pREP4)
感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- φ80 lacZΔM15 thi lac- mtlrecA+ KanR
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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