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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡介
Stbl3 菌株來源于大腸桿菌 HB101 菌株，是慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株?；蚪M帶有重組酶
recA13 突變，可有效抑制長片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率；但由于菌株不含核酸
酶 endA1 突變，因此體內(nèi)核酸酶含量較高，在提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中的去蛋白液進(jìn)
行處理，否則抽提出的質(zhì)粒很不穩(wěn)定，易降解。此菌株具有鏈m素抗性，不存在 lacIqZΔM15，不
可用于藍(lán)/白斑篩選實(shí)驗(yàn)。經(jīng) pUC18 轉(zhuǎn)化檢測(cè)，Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞的效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Stbl3 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB- ) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (StrR) xyl-5 λ- leu mtl-1 endA1+
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
產(chǎn)品特性
-屬于大腸桿菌 K 株系列，主要用于目標(biāo)基因的克隆和質(zhì)粒的保存；不可用于以 T7 RNA 聚合酶為
表達(dá)系統(tǒng)的蛋白表達(dá)；
-該菌株適合克隆不穩(wěn)定插入片段，甲基化的基因組序列，以及慢病毒載體的構(gòu)建。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90 s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入900 μL LB或SOC培養(yǎng)基（室溫或37 ℃預(yù)熱），然后置于37 ℃搖床復(fù)壯45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
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