MTT溶液（5mg/ml）說明書

MTT溶液（5mg/ml）

產(chǎn)品貨號：T10182

產(chǎn)品規(guī)格：5ml/10ml

產(chǎn)品簡介：

MTT比色法是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測。MTT檢測原理在于活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色 Formazan并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。在特定溶劑 (如DMSO)存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測定570nm波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 細(xì)胞培養(yǎng)液

2. 胰蛋白酶消化液

3. 低速離心機(jī)

4. 96孔培養(yǎng)板

5. 細(xì)胞計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)器

6. DMSO或Formazan solvent

7. 搖床

8. 顯微鏡

9. 酶聯(lián)免疫檢測儀

操作步驟 (僅供參考) ：

1. 細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生長期，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無需消化)。

2. 低速離心，收集細(xì)胞沉淀。

3. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。

4. 細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，一般接種密度為3000～10000 /孔。通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加3000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入6000個細(xì)胞即可。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。

5. 37℃ 5%CO₂繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6～24h。

6. 按照實(shí)驗(yàn)具體要求，給予0～20μl干預(yù)藥物處理，37℃ 5%CO₂繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。

7. 棄培養(yǎng)液，每孔加入10μl MTT solution和100μl新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h。

8. 棄培養(yǎng)液，每孔加入110μl DMSO，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時(shí)間會短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時(shí)間會長一些。

9. 在酶聯(lián)免疫檢測儀570nm測定各孔吸光度。

注意事項(xiàng)：

1. MTT solution(5mg/ml)盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請勿使用。

2. 由于使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，應(yīng)注意蒸發(fā)問題。

3. MTT solution在低溫情況下會凝固，使用前請置于室溫或20～25℃水浴至全部融解后使用。

4. 觀察formazan是否*溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。

5. 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)盡量細(xì)菌避免污染。

6. 應(yīng)注意設(shè)立OD調(diào)零孔和對照。

7. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。