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使用桿粒提取試劑盒時這些事情需注意了！

時間：2021/12/14閱讀：527
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　　桿粒提取試劑盒使用時不純化的桿粒DNA存在-20℃，因為反復(fù)凍融會剪切DNA。分析重組桿粒DNA（PCR鑒定重組桿粒DNA）或轉(zhuǎn)染昆蟲細胞。它適用于大量從DH10Bac轉(zhuǎn)化株提取重組桿粒pFastBac。純化后的桿粒DNA使用PCR檢驗或者進行轉(zhuǎn)染。
 

桿粒提取試劑盒

 

　　桿粒提取試劑盒操作步驟：
　　1、5ml離心管12000rpm離心1min收集細胞。
　　2、真空吸干上清，0.3ml的Solution1重懸沉淀，輕輕地震蕩或上下混勻。
　　3、0.3ml的Solution2輕輕混勻，室溫孵育5min。注意：懸浮的沉淀應(yīng)該從渾濁到幾乎半透明。
　　4、緩慢加入0.3mlKAC，加入過程中輕輕混勻，冰上放置5-10min。
　　5、12000rpm離心10min。
　　6、輕輕將上清轉(zhuǎn)移到含有0.8ml異丙醇的離心管，不要吸到白色沉淀，顛倒混勻，冰上孵育5-10min。
　　7、室溫12000rpm離心15min。
　　8、小心棄去上清，不要浮起沉淀，加入0.5mlWashBuffer，顛倒離心管數(shù)次清洗沉淀。
　　9、室溫12000rpm離心5min。重復(fù)8和9。
　　10、輕輕吸棄上清，室溫5-10min干燥沉淀，不要過分干燥。注意：勿使用真空離心選裝蒸發(fā)儀去干燥DNA。
　　11、40μlEndSolution重新溶解DNA沉淀，為避免剪切，勿機械重懸DNA，讓溶液順管子輕輕流下溶解DNA。
 

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