BCA蛋白濃度測定試劑盒使用說明書

BCA蛋白濃度測定試劑盒

產(chǎn)品貨號：34001

產(chǎn)品規(guī)格：100次/250次/500次

產(chǎn)品簡介：

BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)目前常用的兩種蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成，實現(xiàn)了蛋白濃度測定的簡單、高穩(wěn)定性、高靈敏度和高兼容性。靈敏度高，檢測濃度下限達到25μg/ml，最小檢測蛋白量達到0.5μg，待測樣品體積為1-20μl。在50-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

    BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20、60、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇(DTT)低于1mM，β-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不適用BCA法時建議試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

包裝清單：

操作步驟：

1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備

取適量5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，用PBS稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取50μl 5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入450μl PBS即可配制成0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)需-20oC長期保存。

2. BCA工作液配制

根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5ml BCA試劑A加100μlBCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。

3. 蛋白濃度測定

a. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補足到20μl，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

b. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl，需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補足到20μl。請注意記錄樣品體積。

c. 各孔加入200μl BCA工作液，37oC放置20-30分鐘。

注: 也可以室溫放置2小時，或60oC放置30分鐘。BCA法測定蛋白濃度時，顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應(yīng)會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當(dāng)延長孵育時間。

d. 用酶標(biāo)儀測定A562，或540-595nm之間的其他波長的吸光度。

e. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白濃度。

常見問題：

1. 測定標(biāo)準(zhǔn)曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。

可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì)。

2. 是否每次測定時都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？

建議每次測定時都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

注意事項：

1. 需酶標(biāo)儀一臺，測定波長為540-595nm之間，562nm最佳。需96孔板。如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但測定時，需根據(jù)比色皿的最小檢測體積，適當(dāng)加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。?

2. 如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

3. EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。