BCA微量蛋白定量試劑盒說明書

BCA微量蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：34021

產(chǎn)品規(guī)格：1000次

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于BCA（Bicinchoninic Acid）法研制而成，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測(cè)定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì) 分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu²⁺絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時(shí)將Cu²⁺還原成Cu⁺。BCA試劑可敏感特異地與Cu⁺結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物。在562 nm處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，可根據(jù)吸收值的大小來測(cè)定蛋白質(zhì)的含量。

本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設(shè)計(jì)，可精確測(cè)定濃度為0.2-100μg/ml的蛋白溶液，試劑盒的靈敏性高，平行性好，不同種蛋白之間的測(cè)量差異極低。每個(gè)試劑盒可以檢測(cè)1000個(gè)樣品。

包裝清單：

操作步驟：

1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備

取適量5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，用PBS稀釋至終濃度為100μg/ml。例如取10μl 5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入490μl PBS即可配制成100μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)需-20oC長(zhǎng)期保存。

2. 工作液配制

根據(jù)樣品數(shù)量，按1體積試劑C加25體積試劑B，混勻后加26體積試劑A，再次混勻（按照C-B-A的順序加，切勿更改加樣順序）。配制適量BCA工作液，充分混勻。

3. 蛋白濃度測(cè)定

a. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0、5、10、20、40、60、80、100μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀   釋液補(bǔ)足到100μl，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、5、10、20、40、60、80、100μg/ml。標(biāo)準(zhǔn)品濃度可根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需求更改。

b. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足100μl，需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到 100μl。請(qǐng)注意記錄樣品體積。

c. 各孔加入100μl工作液，60oC放置60分鐘。

d. 用酶標(biāo)儀測(cè)定A562，或540-595nm之間的其他波長(zhǎng)的吸光度。

e. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和A562值做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計(jì)算出樣品的蛋白濃度。

常見問題：

    1. 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。

     可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)。

2. 是否每次測(cè)定時(shí)都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？

建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)?/span>BCA法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

注意事項(xiàng)：

    需酶標(biāo)儀一臺(tái)，測(cè)定波長(zhǎng)為540-595nm之間，562nm最佳。需96孔板。如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但測(cè)定時(shí)，需根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積，適當(dāng)加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。?

    如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請(qǐng)?jiān)囉?/span>Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒。

    EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時(shí)，請(qǐng)?jiān)囉?/span>Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒。

    本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

    為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。