肌纖維ATPase染色液（鈣激活法）說明書

肌纖維ATPase染色液（鈣激活法）

產(chǎn)品貨號：R23272

產(chǎn)品規(guī)格：4×50ml

產(chǎn)品簡介：

三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一種水解酶，是催化ATP分解產(chǎn)生能量的一種酶，根據(jù)所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、線粒體三磷酸腺苷酶等。肌球蛋白三磷酸腺苷酶(myosin ATPase)最適pH為9.2~9.4，被鈣離子激活而被鎂離子抑制。它分解ATP時所產(chǎn)生的能量供肌肉收縮之用。此酶定位于骨骼肌，常用來區(qū)分兩型肌纖維。I型肌纖維又稱紅肌，是慢纖維，即肌纖維的收縮較慢而活動持久，其酶活性高，染色深；II型肌纖維又稱白肌，是快纖維，即肌纖維的收縮快，但活動不持久，其酶活性低，染色淡。ATPase水解ATP反應如下：

A-P-P-P + H₂O→A-P-P + H₃PO₄ +能量

肌纖維ATPase染色液(鈣激活法)的原理是ATPase水解ATP為ADP和磷酸，磷酸與鈣離子在酶活性部位結(jié)合形成無色的磷酸鈣沉淀，磷酸鈣經(jīng)氯化鈷處理形成磷酸鈷，再經(jīng)硫化液處理便形成棕黑色的硫化鈷沉淀在酶活性部位。此酶利用酸或堿做前孵育處理，用堿做前孵育處理時，僅白肌纖維出現(xiàn)陽性反應，這對肌球蛋白ATPase是特異性的；用酸做前孵育處理時，紅肌纖維首先倍染色。因此鈣激活法的ATPase染色主要用來區(qū)分紅肌和白肌，這對神經(jīng)性肌wei縮和肌源性肌wei縮的診斷有一定價值。本產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

需自備的儀器和用品：

骨骼肌等組織的冰凍切片、水浴鍋或恒溫箱、蒸餾水、梯度乙醇、中性樹膠、二甲苯或環(huán)保浸蠟脫蠟透明液。

操作步驟 (僅供參考) ：

1. 取新鮮組織，低溫恒冷冰凍切片(用液氮快速冷凍效果更佳)，厚度6μm，連續(xù)切片貼于玻片上，分別命名為A片、B片，切片不需要固定。

2. 配制ATPase孵育液：ATPase孵育液A和ATPase孵育液B等比例混合即可，pH應為9.3~9.5，即配即用。

3. 配制ATPase硫化工作液：ATPase硫化溶液用蒸餾水稀釋50~100倍即可，即配即用。

4. 酸性孵育液、堿性孵育液和ATPase孵育液使用前應提前37℃孵育10min。

5. A片浸入酸性孵育液，37℃孵育5min，水沖洗5s，再浸入堿性孵育液37℃孵育30s，水沖洗5s。

6. 取B片浸入堿性孵育液，37℃孵育15min，水沖洗5s。

7. 將A片和B片浸入ATPase孵育液，37℃孵育30~60min，水沖洗5s。

8. 入ATPase鈷溶液孵育3min，水沖洗5s。

9. 切片入硫化工作液，孵育30~60s，水沖洗30s。

10. 常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固。

染色結(jié)果：ATPase主要呈黑色或棕黑色。

注意事項： 

1. 三磷酸腺苷酶經(jīng)固定后活性大受影響，因此切片不經(jīng)固定。

2. ATPase孵育液經(jīng)混合后pH接近9.4，此時比較適宜酶的染色，如有條件，應測定并調(diào)整pH合格后再使用。如果pH偏離很大或出現(xiàn)沉淀都可能導致染色失敗，應即配即用。

3. ATPase硫化液有腐蝕性和刺激性氣味，應小心操作。每次用過后應擰緊蓋子，否則容易揮發(fā)失效。配制硫化工作液時應在通風櫥內(nèi)操作。

4. ATPase硫化工作液配后不久自行分解而失效，應每次小量配制。

5. 冰凍切片染色時，應減少切片在室溫暴露的時間。

6. 染色效果與酸性孵育液、堿性孵育液、ATPase孵育液的pH變化有很大關(guān)系，盡量減少改變pH的因素，如避免反復開蓋、避免室溫放置過久等。

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 6個月有效。4℃運輸，4℃保存。